死細胞を蛍光標識、FACSで迅速識別 Live-or-Dye™ Fixable Viability 染色キット

Live-or-Dye™ Fixable Viability 染色キットは、フローサイトメトリー／顕微鏡により生細胞と死細胞を識別できるキットです。

細胞膜の選択的透過性が失われた死細胞を蛍光標識して、解析結果から除外することができるため、フローサイトメトリーによる細胞表面のタンパク質発現の解析などにご使用いただけます。

• 明るい蛍光色素： 生細胞と死細胞を明確に分離
• 安定性： 蛍光強度は固定や透過処理による影響をほとんど受けないため、染色細胞を安定的に保存することができる
• 柔軟性： フローサイトメトリーや顕微鏡で識別でき、免疫染色などの細胞染色技術と併用が可能
• 多様な選択： ８色の蛍光色素から選択でき、マルチカラーフローサイトメトリーや細胞イメージングに最適

• Fixable Dead Cell Stain
• DMSO（無水）

本キットには、細胞膜非透過性のアミン反応性色素が含まれています。この色素は、膜の完全性が損なわれた死細胞に入り、細胞内タンパク質の遊離アミンを共有結合により標識します。生細胞では、色素が細胞表面タンパク質に反応しますが、細胞内タンパク質ほど豊富ではないため、死細胞に比べて染色性が低下します（図1、図2）。

また、顕微鏡を用いて生細胞／死細胞を識別することも可能です（図3）。顕微鏡用には、Live-or-Dye™ 488/515、Live-or-Dye™ 568/583、Live-or-Dye™ 594/614、Live-or-Dye™ 640/662 の4種類の蛍光色素を検証済みです。

図1 生細胞／死細胞の識別の原理

Live-or-Dye™ による標識は非常に安定しているため、細胞を固定・透過処理しても、蛍光強度の低下や、細胞間の色素移行が起こりません。免疫染色への影響を防ぐために、生細胞の染色を最小限に抑えながら、効率的に生／死の識別ができるように、染色プロトコールを最適化しています。8種類の蛍光色素をご用意しており、マルチカラー解析に最適です（図2参照）。

図2 フローサイトメトリーによる Jurkat 細胞の生／死の識別
熱で死滅させた細胞（各色で塗りつぶしたピーク）は、生細胞（白色のピーク）と比較して蛍光強度が強いため、両者を明確に識別できる。

FC=フローサイトメトリー、M=顕微鏡

図3 蛍光顕微鏡による生細胞／死細胞の識別
HeLa細胞を 15% エタノールで10分間処理し、細胞の一部を死滅させた。プロトコールに従い、本製品4色のうち各1色で細胞を染色した。すべての細胞を 4% ホルムアルデヒド in PBS で室温・20分間固定し、続いて 0.1% Triton X-100 in PBS で室温・30分間透過処理した後、Hoechst 33342で生細胞と死細胞の両方を染色した。エタノールで死滅させた細胞は本製品で明瞭に染色され、生細胞は染色されなかった（Hoechst 33342により核を青色に染色）ことから、両者を明確に識別できる。

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