記事ID ： 11809

免疫反応を高活性化！ MEGACD40L® : 改良型CD40L（CD154）

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

MEGACD40L®は、高活性、高純度のCD40L（CD40 ligand：CD40リガンド）で、免疫反応を活性化します。

背景

CD40L（CD40リガンド）とは？

CD40L（CD40 ligand：CD40リガンド）とは、活性化T細胞に主に発現する約33kDaのII型膜貫通のTNFスーバーファミリータンパク質です。CD40と結合することでB細胞の増殖や接着性、分化を刺激するため、T細胞依存的な抗原へのB細胞のさまざまな段階の応答に関与します。このことから、移植拒絶反応や関節リウマチ、甲状腺疾患、多発性硬化症、アテローム硬化症、ぜんそく関連起動炎症、自己免疫疾患、がんに対する免疫応答として重要です。

CD40LとMEGACD40L® の違い

CD40L は生体内で1つの三量体を形成していますが、MEGACD40L®は人工的にアディポネクチンのコラーゲンドメインを介して三量体を2セット形成させたキメラタンパク質です。この構成がin vivoにおけるCD40Lの膜介在集合体を模倣しており（下図）、【CD40L + エンハンサー】の組み合わせに代わって簡易かつ同等以上の免疫反応の活性効果をもたらします。

CD40LとMEGACD40L

使用目的

三量体のCD40L（CD40 ligand）2つをアディポネクチン（ACRP30/AdipoQ）のコラーゲンドメインを介して結合させた、高活性構成体です。in vivoにおけるCD40L の膜介在集合体を効果的に模倣することができます。

特長

高純度：競合品と比べて10-100倍低いエンドトキシン（≦0.1EU/μg）
高活性：CD40Lの膜介在集合体を模倣し、エンハンサー不要で刺激可能
一貫性：ロット間差のない経験豊富な製造工程
安定性：安定性の向上と活性強化のために改良された最適構造

その他

由来：CHO細胞
CD40L（CD154）の細胞外ドメイン（aa 116-261）を、N末端でマウスACRP30headless（aa 18-111）およびFLAG®-tagで融合したタンパク質（図1）
生理活性：ヒトCD40との結合、B細胞の活性化

MegaCD40L(TM)の図形表示
図1　本品の図形表示

使用例

左：競合他社品とのエンドトキシン含量の比較右：SDS-PAGEのクマシーブルー染色
図2
左：競合他社品とのエンドトキシン含量の比較
右：SDS-PAGEのクマシーブルー染色
レーン1：分子量マーカー
レーン2：本品

MegaCD40L(TM)によるB細胞リンパ球の活性化
図3　本品によるB細胞リンパ球の活性化
末梢血単核球（PBMC）を、48ウェルプレートに1×10⁶cells/wellで播種し、5％CO₂、37℃で48時間インキュベートした。各ウェルには、段階希釈した本品を添加した血清フリーの試験培地200μLを含む。処理後、細胞を洗浄し、マウス抗ヒトCD19-PE抗体及びマウス抗ヒトCD86-APC抗体で二重染色し、フローサイトメトリーで分析した。各濃度におけるCD86陽性で二重染色されたCD19陽性B細胞のパーセントを表示した。

図4 MＥＧＡCD40L®とCD40L(品番：ALX-850-064)とのB細胞の活性化比

図5　信頼性の高い製造工程による一貫した試験結果
本品の連続する7つの製造ロットについて、B細胞活性化アッセイを用いてロット間差を試験した（1000ng/mL）。

図6　安定なタンパク質
本品を37℃、25℃、4℃、-20℃に2ヶ月間保存し、B細胞活性化アッセイにより、タンパク質活性をテストした。過酷な保存条件でもタンパク質の活性が保たれていることが示唆された。

MEGACD40L®

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
MEGACD40L^(R) Protein (soluble), Human	ENZ	ALX-522-110-C010	10 UG	￥141,000
MEGACD40L (soluble), Mouse	ENZ	ALX-522-120-C010	10 UG	￥150,000

［関連商品］

使用文献多数！

A human monoclonal antibody targeting the conserved staphylococcal antigen IsaA protects mice against Staphylococcus aureus bacteremia: S. van den Berg, et al.; Int. J. Med. Microbiol. 305, 55 (2015), Application(s): ELISA, PCR of human blood samples, Abstract;
CD40L Induces Functional Tunneling Nanotube Networks Exclusively in Dendritic Cells Programmed by Mediators of Type 1 Immunity: C. Zaccard, et al.; J. Immunol. 194, 1047 (2015), Application(s): Activation of mature human dendritic cells, Abstract;
A GPBAR1 (TGR5) small molecule agonist shows specific inhibitory effects on myeloid cell activation in vitro and reduces experimental autoimmune encephalitis (EAE) in vivo: N. Lewis, et al.; PLoS One 9, e100883 (2014), Application(s): Assay of human PBMC, Abstract; Full Text
Development of a novel anti-canine CD20 monoclonal antibody with diagnostic and therapeutic potential: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 56, 219 (2014), Application(s): Analysis of canine B-cell lymphoma cells, Abstract;
Exosomes Derived from Burkitt’s Lymphoma Cell Lines Induce Proliferation, Differentiation, and Class-Switch Recombination in B Cells: C. Gutzeit, et al.; J. Immunol. 192, 5852 (2014), Application(s): PCR, Assay of human B cells, Abstract; Full Text
Preclinical evaluation of the novel, orally bioavailable Selective Inhibitor of Nuclear Export (SINE) KPT-335 in spontaneous canine cancer: results of a phase I study: C. London, et al.; PLoS One 9, e87585 (2014), Application(s): Analysis of canine tumor cells by WB, FLOW, Abstract; Full Text
Thyrotropin receptor and CD40 mediate interleukin-8 expression in fibrocytes: implications for thyroid-associated ophthalmopathy (an American Ophthalmological Society thesis).: R. Douglas, et al.; Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 12, 26 (2014), Application(s): In vitro analysis of human fibrocytes, Abstract; Full Text
AMPKα1 deficiency amplifies proinflammatory myeloid APC activity and CD40 signaling: K.C. Carroll, et al.; J. Leukoc. Biol. 94, 1113 (2013), Abstract;
CD40 ligand is necessary and suffi cient to support primary diff use large B-cell lymphoma cells in culture: a tool for in vitro preclinical studies with primary B-cell malignancies: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 53, 1390 (2012), Application(s): Flow cytometry of human B cells, Abstract; Full Text
CD40 ligand is necessary and sufficient to support primary diffuse large B-cell lymphoma cells in culture: a tool for in vitro preclinical studies with primary B-cell malignancies: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 53, 1390 (2012), Application(s): Cell Culture, Abstract;
HIV-1 gp120 impairs the induction of B cell responses by TLR9-activated plasmacytoid dendritic cells: N.P. Chung, et al.; J. Immunol. 189, 5257 (2012), Application(s): Activation of dendritic cells, Abstract; Full Text
Immunodeficiency, autoinflammation and amylopectinosis in humans with inherited HOIL-1 and LUBAC deficiency: B. Boisson, et al.; Nat. Immunol. 13, 1178 (2012), Application(s): ELISA of human blood cells, Abstract; Full Text
Interleukin-6 Production in CD40-Engaged Fibrocytes in Thyroid-Associated Ophthalmopathy: Involvement of Akt and NF-κB: E.F. Gillespie, et al.; Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 7746 (2012), Application(s): CD40 ligation, induction and signaling in Graves' orbital fibroblasts (GOFB) and fibrocytes, Abstract; Full Text
Effects of NOD-like receptors in human B lymphocytes and crosstalk between NOD1/NOD2 and Toll-like receptors: T. Petterson, et al.; J. Leukoc. Biol. 89, 177 (2011), Abstract;
New mechanism of X-linked anhidrotic ectodermal dysplasia with immunodeficiency: impairment of ubiquitin binding despite normal folding of NEMO protein: M. Hubeau, et al.; Blood 118, 926 (2011), Abstract;
Reconstitution of huPBL-NSG mice with donor-matched dendritic cells enables antigen-specific T-cell activation: A. Harui, et al.; J. Neuroimmune Pharmacol. 6, 148 (2011), Application(s): Activation of dendritic cells, Abstract; Full Text
Study of patients with Hyper-IgM type IV phenotype who recovered spontaneously during late childhood and review of the literature: N. Karaca, et al.; Eur. J. Pediatr. 170, 1039 (2011), Application(s): Determining human B-cell function in Hyper-IgM blood samples, Abstract;
The CD40-CD154 interaction would correlate with proliferation and immune escape in pancreatic ductal adenocarcinoma: Y. Shoji, et al.; J. Surg. Oncol. 106, 230 (2011), Abstract;
Human TRAF3 adaptor molecule deficiency leads to impaired Toll-like Receptor 3 response and susceptibility to Herpes Simplex Encephalitis: R. Perez de Diego, et al.; Immunity 33, 400 (2010), Abstract;
Reconstitution of huPBL-NSG mice with donor-matched dendritic cells enables antigen-specific T-cell activation: A. Harui, et al.; J. Neuroimmune Pharmacol. 6, 148 (2010), Abstract; Full Text
Therapeutic Implications of the IL-21: IL-4 receptor system in children with common variable immunodeficiency syndrome: S. Borte, et al.; Klin. Padiatr. 222, 362 (2010), Abstract;
Multimeric soluble CD40 ligand (sCD40L) efficiently enhances HIV specific cellular immune responses during DNA prime and boost with attenuated poxvirus ventors MVA and NYVAC expressing HIV antigens : C.E. Gomez, et al.; Vaccine 27, 3165 (2009), Abstract;
Small-molecule costimulatory blockage: organic dye inhibitors of the CD40-CD154 interaction: E. Margolles-Clark, et al.; J Mol Med 87, 1133 (2009), Abstract;
Impaired CD40L signaling is a cause of defective IL-12 and TNF-alpha production in Sezary syndrome: circumvention by hexameric soluble CD40L: L.E. French, et al.; Blood 105, 219 (2005), Abstract; Full Text
Two adjacent trimeric Fas ligands are required for Fas signaling and formation of a death-inducing signaling complex: N. Holler, et al.; Mol. Cell. Biol. 23, 1428 (2003), Abstract; Full Text