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標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポート shRNA/miRNA発現アデノ随伴ウイルス(AAV) / アデノウイルス(AdV)作製受託サービス
SignaGen社：標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポート

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メーカー名：SignaGen Laboratories

SignaGen社shRNA/miRNA ウイルス作製サービスでは、標的のノックダウンに有用なshRNA配列の獲得及びベクターの構築から独自技術による高タイターAAV/AdV作製まで、ノックダウン用AAV/AdV作製を幅広くサポートします。CRISPR-Cas9によるノックアウト用AAV/AdV作製も可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。

参考情報

ウイルス選択の手引

特長

独自技術により高タイターでAAV/AdVを作製（AAV：>10¹³ VG/mL, AdV:>5x10¹⁰）
バリデーションサービスにより、標的遺伝子のノックダウンに有用なshRNA配列の獲得が可能
多様なプロモーター・レポーターを選択可能（図1、図2）
dsAAVベクターも使用可能
AAVは多様なセロタイプで作製可能
（AAV1～9, AAV-PHP.B, AAV-PHP.eB, AAV-DJ/8, AAV-DJ）

※上記以外のセロタイプも対応可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。

サービス一覧

shRNA バリデーションサービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列が無い場合
shRNA ウイルス作製受託サービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列がある場合
shRNA/miRNA ウイルスパッケージングサービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列発現用Cis-plasmidまたはアデノウイルスベクターをお持ちの場合

shRNA バリデーションサービス

標的遺伝子に対して80%以上のノックダウン効率を示すshRNA配列を獲得するサービスです。

作業内容

① 標的遺伝子 (GOI) をウイルスシャトルベクターにクローニング
② 最大6種のshRNA をデザイン・合成し、①とは異なるベクターにクローニング
③ 前工程で構築した2種のプラスミドをHEK293細胞へトランスフェクション
④ mCherry発現を指標に、標的遺伝子のサイレンシングを定量
※80%以上のノックダウン効率を示す配列が得られなかった場合は、条件を満たす配列が得られるまで繰り返します。

図1. shRNAバリデーションサービスのフロー(AAV)

〈納品物〉

デザイン・合成した6種のshRNA発現用プラスミドとバリデーションのデータ

shRNA ウイルス作製受託サービス

shRNAのデザインからベクターの構築、ウイルスのパッケージングまで行うサービスです。

作業内容

アデノ随伴ウイルス（AAV）

shRNAのデザイン及びCis-plasmidの構築、AAVへのパッケージング
2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
qPCRによるAAVのタイトレーション

アデノウイルス（AdV）

shRNAのデザイン及びアデノウイルスベクターの構築、Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製（Large scale のみ）
リコンビナントアデノウイルスの PFU測定

ベクターのITR間の配列は、以下の中からご希望のプロモーター、レポーター、セレクションマーカーをお選び頂けます。

Promoter 1		Promoter 2	Reporter
None	ELA1	None	None
CMV	Enh358MCK	CMV	eGFP
CAG	cTNT	CAG	RFP
H1	GFAP	H1	mRFP
U6	MBP	U6	mCherry
Synapsin	SST	Synapsin	tdTOMATO
UBC	TBG	UBC	TurboGFP
EF1a	aMHC	EF1a	eYFP
ALB(1.4)	hRPE	CaMKII	Venus
ApoE/AAT1	mlP1	cTNT	Luc
CaMKII	tMCK	GFAP	LacZ

図.2 Cis-plasmid / アデノウイルスシャトルベクターの構造

作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。

アデノ随伴ウイルス(AAV)
Scale	濃度(※1)	容量(※2)	納期	グレード
Large	>1×10¹³ VG/mL	1 mL (10 × 100 µL)	4～5週間 (※3)	in vivo
Medium	>1×10¹³ VG/mL	200 µL (5 × 40 µL)
Pilot	>1×10¹³ VG/mL	100 µL (2 × 50 µL)

アデノウイルス(AdV)
Scale	濃度(※1)	容量(※2)	納期	グレード
Large	>5×10¹⁰ ～ >5×10¹¹ PFU/mL	2 mL (10 × 200 µL)	4～5週間 (※3)	in vivo
Medium	>5×10¹⁰ ～ >5×10¹¹ PFU/mL	2 mL (10 × 200 µL)		in vitro
Pilot	>5×10¹⁰ ～ >5×10¹¹ PFU/mL	1 mL (5 × 200 µL)		in vitro

※1：最終的なウイルス産生量はshRNAの性質に依存します。

※2：上記以上のスケールも対応可能です。

※3：shRNA配列の合成をSignaGen社にご依頼頂く場合、納期は都度見積もりとなります。

shRNA/miRNA ウイルスパッケージングサービス

お送り頂いたshRNA/miRNA発現用のCis-plasmidまたはアデノウイルスベクターを使用し、ウイルスのパッケージングを行うサービスです。

作業内容

アデノ随伴ウイルス（AAV）

お送り頂いたCis-plasmidを使用したAAVのパッケージング
2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
qPCRによるAAVのタイトレーション

アデノウイルス（AdV）

Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製（Large scale のみ）
リコンビナントアデノウイルスの PFU測定

作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。

アデノ随伴ウイルス(AAV)
Scale	濃度(※1)	容量(※2)	納期	グレード
Large	>1×10¹³ VG/mL	1 mL (10 × 100 µL)	3～4週間	in vivo
Medium	>1×10¹³ VG/mL	200 µL (5 × 40 µL)
Pilot	>1×10¹³ VG/mL	100 µL (2 × 50 µL)

アデノウイルス(AdV)
Scale	濃度(※1)	容量(※2)	納期	グレード
Large	>5×10¹⁰ ～ >5×10¹¹ PFU/mL	2 mL (10 × 200 µL)	4～5週間	in vivo
Medium	>5×10¹⁰ ～ >5×10¹¹ PFU/mL	2 mL (10 × 200 µL)	4～5週間	in vitro