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研究用

タンパク質過酸化物を測定するキットOxiSelect™ AOPP アッセイ

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OxiSelect™ AOPP アッセイキットは、タンパク質酸化マーカーであるAOPP(advanced oxidation protein products)を血漿、ライセート、組織ホモジネートから測定するためのキットです。

本製品には、クロラミンスタンダードと、AOPP-HSA コンジュゲート(ポジティブコントロール)が含まれます。また、スタンダードとサンプルを含めて200テスト分の試薬が含まれます。

背景

タンパク質過酸化物 AOPP とは

酸化ストレスは、抗酸化物質と酸化剤のバランスが崩れることによる活性酸素種(ROS)産生の増加と定義されます。タンパク質過酸化物 AOPP(Advanced Oxidation Protein Products)は、尿毒症毒素であり、クロラミンや次亜塩素酸などの塩素系酸化剤と血漿タンパク質の反応を介した酸化ストレスによって生じます。AOPPは、終末糖化産物(AGE; Advanced Glycation End-Product)と構造的に高い類似性を持ち、 同様の生物学的活性を発揮します。AOPPは、腎臓合併症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、全身性硬化症、ならびにHIV陽性の患者で上昇が見られます。in vivo で生じた AOPP と HOCl で処理したヒト血清アルブミン(HSA)は、好中球および単球での酸化反応を誘発します。このことは、AOPP と HOCl が真の炎症メディエーターであることを示唆します。血中 AOPPの分解と除去メカニズムは、完全に解明されておりませんが、主に肝臓と脾臓がAOPPの分離と除去に関連していると考えられています。

AOPPアッセイは、多くの尿毒症関連の疾患状態や化合物の抗酸化特性の測定においてフリーラジカル活性に関連する情報を提供します。AOPP-HSA 濃度は、クロラミンスタンダードから決定されます。

特長

  • 細胞ライセート、組織ホモジネート、血漿中の AOPP 形成を測定。
  • 30分以内で迅速に結果を得られます。
  • 標準的マイクロプレートリーダーで定量的測定

構成内容

  • アッセイ用希釈液 (10×)
  • AOPP-HSA ポジティブコントロール
  • クロラミンスタンダード
  • クロラミン反応開始剤
  • 反応停止液

アッセイ原理

AOPP(Advanced Oxidation Protein Products)アッセイは、生体試料中のAOPP量を定量的に測定するためのアッセイです。未知のAOPP含有サンプルまたはクロラミンスタンダードを、クロラミン反応開始剤と混合することで発色が開始されます。インキュベーション後、反応停止液を加え、標準的なマイクロプレートリーダーで比色測定を行います。未知試料中のAOPP量は、クロラミンスンタンダードカーブと比較することで算出します。

プロトコール

  1. サンプルを調製します。血漿サンプルなどは、1X アッセイ用希釈液またはPBSで希釈します。
  2. 試薬を調整し、完全に混ぜます。
  3. 200 µL のサンプルまたはスタンダードをそれぞれマイクロプレートのウェルに分注します。
  4. 10 μLのクロラミン反応開始剤を各ウェルに加えます。
    よく混合し、5分間インキュベートします。(on a table top rotator or shaker)
  5. 20 µL の反応停止液を加え、よく混ぜます。
  6. プレートリーダーで吸光度を測定します。(340 nm )

測定例

クロラミンスタンダードカーブ
図1.クロラミンスタンダードカーブ

AOPP-HSAポジティブコントロールと未処理HSA
図2.AOPP-HSAポジティブコントロールと未処理のHSAをそれぞれ100μM濃度に調製し、本キットのアッセイプロトコールに従い試験した。

参考文献

1. Deschamps-Latscha B. et al. (2005) Am. J. Kidney Dis. 45(1): 39-47.
2. Servettaz, A. et al. (2007) Ann. Rheum. Dis. 66: 1202-1209.
3. Witko-Sarsat, V. et al. (1996) Kidney International 49: 1304-1313

OxiSelect™ AOPP アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM AOPP Assay Kit詳細データ CBL STA-318 1 KIT
[200 assays]
¥98,000
AOPP-HSA, Human詳細データ CBL STA-319 50 UL
¥58,000
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