記事ID ： 1637

ユビキチン結合タンパク質生成キット（Ubiquitin conjugating kit）

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

プロテアソーム分解実験、酵素の機能や活性に及ぼすユビキチン修飾の影響の検討等に用いる、ユビキチン結合タンパク質（ユビキチンコンジュゲーション）を作製するためのキットです。ユビキチン修飾サイトのマッピングやプロテアソーム分解アッセイに最適です。

使用目的

プロテアソーム分解実験、酵素の機能や活性に及ぼすユビキチン修飾の影響の検討等に用いる、ユビキチン結合タンパク質を生成するためのキットです。HeLa S100 溶解液は、外部から添加された、もしくはユビキチンカスケード内のターゲット基質タンパク質を含む内因性の、ユビキチン結合の制御を促進します。結合構造はユビキチン結合特異的抗体と、もしくはターゲットタンパク質特異的抗体を用いたウェスタンブロッティングにより検出できます。

構成内容

HeLa S100 fraction（S100）
10 X ユビキチン溶液（Ub）
10 X ATP-（Energy）regeneration 溶液（ATP-ERS）
ユビキチン化バッファー
ユビキチンアルデヒド（阻害剤）
ユビキチン結合特異的抗体溶液（FK2）

使用例

図1．S100ユビキチン結合アッセイによるウエスタンブロット結果
A）内在性HELA S100ライセート中の一般的なタンパク質のユビキチン化を、キットに含まれるUbiquitin-conjugate特異的抗体を用いて検出した。
B）外因的にp53を添加したHeLa S100ライセート中のp53の特異的修飾を、p53 抗体（品番：BML-PW1095-0025）用いて検出した。
これらの結果から、本キットは、内在性のS100ライセートタンパク質に対しても、p53のような関心の高い特定のタンパク質に対しても、ユビキチン化修飾を検出するのに有用であることが示唆された。また、ATP添加（+レーン）のアッセイでは、ATP未添加のコントロール（-レーン）に比べてユビキチンタンパク質レベルが高いことから、これらの修飾がATPに依存していることが示された。