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研究用

Rhod-2に代わる新規Ca²+蛍光指示薬Screen Quest™ Rhod-4 NW カルシウムアッセイキット

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カルシウムフラックスアッセイはGタンパク質共役受容体 (GPCRs) をスクリーニングするドラッグ・ディスカバリーによく使われる手法です。本キットは細胞内カルシウム動員を検出するために一種類の蛍光色素をベースにしたアッセイを提供しています。

背景

Rhod-4™色素とは

最も一般的に使用されている赤色蛍光カルシウム指示薬はRhod-2ですが、これは生細胞中でエステラーゼにより加水分解を受けて中程度の蛍光しか発せず、細胞のカルシウム応答が非常に弱いことが問題視されています。さらに、Rhod-2は導入後ミトコンドリア内に濃縮され、細胞内に均一に局在しません。Rhod-4™は、Rhod-2の細胞導入とカルシウム応答を改善しつつ、Rhod-2と類似したスペクトル波長をもつよう開発された色素です。CHOやHEK細胞において、Rhod-4™ AM (Cat# 21112)の細胞内カルシウム応答はRhod-2 AMに比べて10倍ほど高感度です。AAT Bioquest社の社内試験では、Rhod-4™ AMはRhod-2 AM では検出できない幹細胞由来心筋細胞に一次的に存在するカルシウムも検出できることが示唆されています。Rhod-4™ AMが高感度なのは細胞導入効率がRhod-2 AMより高いからかもしれません。

使用目的

カルシウムを通じて伝達するGPCRを発現する細胞は、細胞膜にクロスできるABD社独自の Rhod-4 NWによってpre-loadされます。

Rhod-4 は、HTS スクリーニングに利用できる赤色のカルシウムインジケーターです。いったん細胞内に入ると Quest Rhod-4™ の親油性ブロッキンググループが非特異的細胞エステラーゼによって開裂され、その結果マイナスにチャージした蛍光色素が細胞内にとどまり、カルシウムに結合することで蛍光強度が増します。細胞がスクリーニングする化合物によって刺激を受けた際、レセプターが細胞内カルシウムの放出を伝達し、その結果、 Rhod-4 の蛍光がさらに増強します (Ex: 488, 514, 532, 546nm、Em: 〜555nm)。

Quest Rhod-4™は、カルシウムと複合体を形成すると、250倍以上の蛍光増強を示す、細胞内カルシウム測定のための理想的なインジケーターです。本キット はGタンパク質共役受容体(GPCRs) やカルシウムチャンネルを観察するための最適化したアッセイです。本アッセイは便利な96-well もしくは 384-well マクロタイタープレートフォーマットで、オートメーションにも対応しています。

構成内容

  • Rhod-4 NW
  • 10 × pluronic® F127 Plus
  • HHBS(品番36332、36335 には含まれません)

pluronic® は BASF 社の登録商標です。

使用例

ABD_00550005_B-90-100-13K_1.gif

図1.Screen Quest™ Rhod-4 NW Assay キットと Rhod-2 AM により測定したHEK-293 におけるカルバコール用量反応
HEK-293細胞を96ウェルプレートに40,000細胞/100μLで播種し、一晩培養した。その後、成長培地を除去し、Screen Quest™ Rhod-4 NW calcium Assay キットあるいは 5μM Rhod-2 AM をそれぞれ 100μL加え、室温で1時間、インキュベートした。

 

ABD_00550005_B-90-100-13K_3.jpg

図2.U2OS 細胞を1ウェルあたり40,000cells/100μLの濃度になるように96ウェルプレートに播種し、一晩培養。培地を除去し、100μLの5μMの Screen Quest™ Rhod-4 AM(左)またはRhod-2(右)をHHBSに加え、37℃で1時間反応させた。細胞を200μLのHHBSで2回洗浄し、蛍光顕微鏡(オリンパス  IX71)のFITCチャンネルを用いて観察した。

Screen Quest™ Rhod-4 NW カルシウムアッセイキット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit *Medium Removal*詳細データ ABD 36330 1 KIT
[1 Plate]
¥20,000
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit *Medium Removal*詳細データ ABD 36331 1 KIT
[10 Plates]
¥83,000
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit *Medium Removal*詳細データ ABD 36332 1 KIT
[100 Plates]
お問い合わせ
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit詳細データ ABD 36333 1 KIT
[1 Plate]
¥41,000
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit詳細データ ABD 36334 1 KIT
[10 Plates]
¥104,000
Screen QuestTM Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit詳細データ ABD 36335 1 KIT
[100 Plates]
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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