抗体やタンパク質にBiotinを結合 Dojindo Labeling Kit シリーズ ‐ ビオチン標識キット

ビオチン標識キットは、NHS基やマレイミド基で活性化したビオチン化試薬を、タンパク質の一級アミノ基（NH2）やチオール基（SH基、スルフヒドリル基）に標識するためのキットです。

ビオチン標識キットは、NHS基やマレイミド基で活性化したビオチン化試薬を、タンパク質の一級アミノ基（NH₂）やチオール基（SH基、スルフヒドリル基）に標識するためのキットです。

得られたビオチン標識タンパク質は、免疫組織染色やELISAにそのまま用いることができます。標識操作は精製抗体を用いて行ってください。抗体の精製には、同社(DMT)のIgG精製キットが便利です。

Reactive Biotin の構造
a) NH₂-Reactive Biotinの構造
b) SH-Reactive Biotinの構造

• 高分子から低分子まで
  分子量50,000以上の高分子の標識を行うことができます。活性化酵素を標識する、アルカリホスファターゼ標識キットとペルオキシダーゼ標識キットでは、分子量5,000以下の低分子の標識も可能です。
• 2タイプの標識方法
  標識方法により、アミノ基標識用のNH₂タイプとチオール基標識用のSHタイプの2種類のキットがございます。NH₂タイプは、N-hydroxysuccinimide (NHS)で活性化した試薬を用いており、タンパク質等のNH₂基を標識することができます。SHタイプはMaleimide活性化しており、還元抗体などSH基を有するサンプルの標識に利用することができます。ご使用のサンプル特性に合わせてお選びください。

NH₂標識

• NH₂-Reactive Biotin
• Washing Buffer
• Reaction Buffer
• Filtration Tube

SH標識

• SH-Reactive Biotin
• Reducing Agent
• Washing Buffer
• Reaction Buffer
• Filtration Tube

標識IgGの調製法

ビオチン標識還元IgGの調整法

＜実験例1＞サンドイッチELISA

Anti-CAT IgG 100 μg をBiotin Labeling Kit-NH₂を用いてビオチン標識し、サンドイッチELISAによりChloramphenicolAcetyltransferase (CAT)を検出した。本キットを用いて作製したビオチン標識抗体を用いた場合、他社のビオチン化キットに比べ、1.5〜2倍高感度であった。

Biotin Labeling Kit - NH₂(BLK-NH₂)、および他社品Kitを用いて作製したビオチン標識 anti-CAT(ChloramphenicolAcetyltransferase)抗体を用いたELISA

＜実験例2＞サンドイッチELISA

Anti-CAT IgG 100μg をBiotin Labeling Kit-SH を用いて ビオチン標識し、サンドイッチELISAによりChloramphenicol Acetyltransferase (CAT)を検出した。本キットを用いて作製 したビオチン標識抗体を用いた場合、他社のビオチン化キット に比べ、10〜12倍高感度であった。

Biotin Labeling Kit - SH(BLK-SH)、および他社品Kitを用いて 作製したビオチン標識 anti-CAT(Chloramphenicol Acetyltransferase)抗体を用いたELISA

＜実験例3＞免疫組織染色

Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 50 μgをBiotin Labeling Kit-NH₂を用いてビオチン標識し、肺高血圧剤(モノクロタリン)を投与したラットの肺動脈凍結切片を染色した。肺動脈近傍で8-ニトログアノシンが検出されており、モノクロタリン投与により肺動脈周辺で引き起こされた炎症によるNO産生が示唆された。

ビオチン標識Anti-Nitroguanosine monoclonal抗体を用いて染色した、肺高血圧剤（モノクロタリン）投与ラット肺動脈凍結切片の組織免疫染色像(×200、HRP標識ストレプトアビジン/DAB染色)。
（画像提供：北里大学医療衛生学部微生物学教室　北里英郎 教授）

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