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高感度で thiol を検出・測定 Amplite™ 蛍光チオール定量アッセイキット

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ 蛍光チオール定量アッセイキットは非常に高感度で蛍光的にチオール（thiol）を定量化します。

キットに含まれる無蛍光試薬はチオールと反応して強い蛍光を発します。操作はワンステップで、100μlのアッセイ量で1pMという微量のGSHを検出できます（図1）。また、96ウェル、384ウェルマイクロプレートに対応し、分離処理もいらないため簡便に自動化が可能です。

特長

幅広い用途：チオールや硫化物を定量化可能（血漿、尿、細胞抽出物等）
高感度：1pMの微量チオールを検出
簡便・短時間
非放射性

構成内容

Thiolite Green™（1 vial）
Assay Buffe（25 ml）
GSH Standard（62 μg）
DMSO（100 μl）

操作手順

96ウェルプレートにThiolite™ Green working solutionをアプライ（50 µl）
GSHスタンダードまたはテストサンプルをアプライ（50 µl）
10分～1時間室温でインキュベート
プレートローダーで測定（Ex/Em ＝ 490/520 nm）

＊上記はメーカーが推奨するスタンダードプロトコールです。必要に応じて改変してください。

使用例

図1 GSHとシステイン応答をAmplite™ Fluorimetric Thiol Quantitation Assay Kitを用い、96ウェル黒色プレート、NOVOStar microplate reader（BMG Labtech社）で検出した。10分インキュベーションした後、10 nM （1 pmol/well）程度の低い値でも検出（n=3）。小グラフは0.3以下の検出値の低い部分を拡大して示す。