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記事ID : 13365
研究用

CMA / CML を ELISA 法で迅速に検出|老化/糖化研究関連シリーズコラーゲン AGEs 抗糖化アッセイキット(特異的 AGEs)

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本キットはプレート上に固相化されたコラーゲンをグリオキサールで糖化をさせたときに生成される CMA(カルボキシメチルアルギニン)もしくは CML(カルボキシメチルリジン)を迅速にELISA 法によって検出するキットです。コラーゲンの糖化反応を阻害する物質のスクリーニングを簡便に行うことができます。

背景

糖類は、生命活動において不可欠な栄養素であるが、一方で生体内のタンパク質のリジンやアルギニン残基を修飾しタンパク質の荷電を変化させて立体構造が変化し、酵素の活性や構造タンパク質の立体構造に大きく影響を及ぼすことが知られています。この反応はメイラード反応(Glycation)もしくは糖化と呼ばれ、アマドリ転位物が生成する前期反応と、酸化、脱水、縮合などの反応を経て後期生成物(Advanced Glycation End-products:AGEs)に至る後期反応に分けられます。皮膚、血管壁、骨などあらゆる臓器を形成する構造タンパク質であるコラーゲンも例外ではなく糖化反応を受けます。

カルボキシメチルリジン:Nε-(carboxymethyl) lysine: CML は非蛍光性・非架橋性 AGEs の一種で、糖化修飾されたタンパク質のリジン残基(フルクトースリジン)が遷移金属から生成するヒドロキシラジカル (1)、一酸化窒素由来のペルオキシナイトライト (2)、炎症反応によって生成する次亜塩素酸 (3) により酸化されて生成する糖酸化生成物で、 生体における主要な抗原性の AGEs 構造として報告されています (4)。また、CML はグルコースの酸化分解より生成するグリオキサールを介して生成する経路も知られています。CML は加齢に伴う皮膚コラーゲンへの蓄積など、 長期的な酸化ストレス蓄積の指標となるほか、アテローム性動脈硬化、糖尿病、アルツハイマー等との関連性も指摘されています。

カルボキシメチルアルギニン:Nω-(carboxymethyl)arginine: CMA は、AGEs の1 種でグリオキサールとアルギニンが反応して生成されます。また、CMA は非蛍光性・非架橋性AGEs という特徴があり、コラーゲンに特異的に生成することが報告されています(1)。生体コラーゲンにAGEs が蓄積すると、コラーゲンの変性に伴って線維芽細胞にも悪影響を及ぼし、血管のみならず肌の老化の要因になると言われています。

生体内AGEs の生成経路
図1 生体内AGEs の生成経路

特長

  • コラーゲンの糖化反応を阻害する物質のスクリーニングを簡便に行うことが可能
  • 機能性食品および化粧品開発における抗糖化素材開発に有用

構成内容

内容 容量 数量
コラーゲン固相化96 ウェルプレート(アルミパウチ入り) 8 well x 12 strips 1枚
プレートシール - 2枚
アミノグアニジン溶液 (10mM) ※抗糖化標準物質 250 uL 1本
検体希釈液 30 mL 1本
グリオキサール溶液 5 mL 1本
洗浄バッファー (x10) 50 mL 1本
ブロッキングバッファー 50 mL 1本
抗体 (抗CMA抗体もしくは抗CML抗体) (x100) 100 uL 1本
HRP 標識二次抗体 (x100) 100 uL 1本
発色液 10 mL 1本
停止液 10 mL 1本

※本キットは、96ウェルプレート1枚分のアッセイが可能です。

実施例

図2 グリオキサールで糖化させた糖化コラーゲンから生成する CML を用いた抗糖化素材の探索
図2 コラーゲンAGEs抗糖化アッセイキット〈CML特異的, グリオキサール〉(品番:AAS-AGE-K02)
グリオキサールで1日間糖化させた糖化コラーゲンから生成するCMLを用いた抗糖化素材の探索。
濃度はウェル中の終濃度を示す。

図3 グリオキサールで糖化させた糖化コラーゲンから生成する CMA を用いた抗糖化素材の探索
図3 コラーゲンAGEs抗糖化アッセイキット〈CMA特異的, グリオキサール〉(品番:AAS-AGE-K03)
グリオキサールで7日間糖化させた糖化コラーゲンから生成するCMAを用いた抗糖化素材の探索。
濃度はウェル中の終濃度を示す。

コラーゲン AGEs 抗糖化アッセイキット CML 特異的

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
コラーゲンAGEs 抗糖化アッセイキット(CML特異的, グリオキサール)
Collagen AGEs Assay Kit, CML-Specific, Glyoxal詳細データ
CSR AAS-AGE-K02 1 KIT
[96 well x 1]
¥80,000

コラーゲン AGEs 抗糖化アッセイキット CMA 特異的

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
コラーゲンAGEs 抗糖化アッセイキット(CMA特異的, グリオキサール)
Collagen AGEs Assay Kit, CMA-Specific, Glyoxal詳細データ
CSR AAS-AGE-K03 1 KIT
[96 well x 1]
¥80,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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