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溶液除去や分離操作不要で高感度に検出 Amplite™ 蛍光NADアッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ 蛍光NADアッセイは、生体サンプル中のNAD⁺を高感度かつ迅速に検出します。

背景

原理

このアッセイでは、ABD社独自のQuest Fluor™NADプローブを利用してNAD⁺を直接測定します。 NAD⁺と結合すると、Quest Fluor™NADは、蛍光マイクロプレートリーダー(Ex / Em = 420/480 nm)で測定される蛍光シグナルを生成します。

特長

HTSアプリケーションに最適な「mix and read」フォーマット
96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
NADHに対する反応が最小
高感度：30 nMのNADを検出

構成内容

Component A: Quest Fluor™ NAD Probe, 1 bottle (5 mL)
Component B: Assay Solution, 1 bottle (5 mL)
Component C: Enhancer Solution, 1 bottle (3.5 mL)
Component D: NAD Standard, 1 vial (332 µg)

プロトコール概要

NADスタンダード及びテストサンプルの調整
Quest Fluor™ NAD プローブの添加
アッセイ試薬の添加
室温で10-20分インキュベート
エンハンサー試薬の添加
室温で10-20分インキュベート
蛍光強度を420/480 nm で測定

製品データ

図1. Amplite™ 蛍光NADアッセイキットを用いたNAD用量反応の測定
96ウェルブラック/ソリッドボトムプレート使用
分析機器Germiniマイクロプレートリーダー（Molecular devices）
A：NAD標準曲線(インキュベーション:20分/検出限界：30 nM), (n=3)
B：NAD応答とNADH応答の比較
C：100 µM NADH存在下でのNAD標準曲線(インキュベーション:20分)
0.3%（～300 nM）のNAD(NADHから還元された)を検出(n=3)