NAPDHを比色/蛍光検出 Amplite™ NADPHアッセイ

Amplite™比色NADPHアッセイは、NADPHプローブ（NADHの還元時に460 nmで最大吸光度を有する発色センサー）を利用して、サンプル中のNADPHを検出するキットです。吸光度の増加は、溶液中のNADPHの濃度に比例します。

Amplite™蛍光NADPHアッセイは、独自のNADPHセンサー（酵素サイクリング反応を介してNADPHを特異的に認識する酵素システム）を利用して、サンプル中のNADPHを検出するキットです。NADPHセンサーがNADPHと結合すると赤色の蛍光を生じます。蛍光強度の増加は、溶液中のNADPHの濃度に比例します。

• 96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
• 溶液除去や分離操作不要
• 高感度：比色(3 µM〜のNADPHを検出) / 蛍光(1 µM〜のNADPHを検出)
• 検出波長：比色(460 nm) / 蛍光（Ex/Em =540/590 nm）

比色

• Component A: NADPH Probe, 1 bottle (4 mL)
• Component B: Assay Buffer, 1 bottle (16 mL)
• Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg, lyophilized )
• Component D: Lysis Buffer, 1 bottle (10 mL)

蛍光

• Component A: NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottles (lyophilized powder)
• Component B: NADPH Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)
• Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg)

1. NADPHワーキング試薬の調整
2. NADPHスタンダード及びテストサンプルの添加
3. 室温で15分―2時間インキュベート
4. 比色：吸光度を460 nmで測定
   蛍光：蛍光強度 Ex/Em = 540/590 nmで測定

Amplite™ 比色NADPHアッセイキット（品番15272）

図.1 Amplite™ 比色NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェル白色クリアボトムプレート使用/ インキュベーション時間：30分
SpectraMaxマイクロプレートリーダー（Molecular devices）測定波長：460 nm
3 µMのNADPHを検出した(n=3)。

Amplite™ 蛍光NADPHアッセイキット（品番15262）

図.2 Amplite™ 蛍光NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェルブラックプレート使用/ インキュベーション時間：1時間
分析機器：NOVOStarマイクロプレートリーダー（BMG Labtech）
NADPには反応を示さず、1 µM（100 pmol/well）のNADHを検出した(n=3)。

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