AAT Bioquest社 抗体とタンパク質標識

特定のタグで抗体を標識することは、生物科学、医学研究では重要かつ日常的な手順になっています。蛍光色素などの視覚的マーカーからビオチンなどのハプテン分子に至るまでのタグは、免疫複合体やタンパク質間相互作用の可視性を高めるために用いられたり、タンパク質の単離や精製に利用できます。

標識タイプを決定するときは、抗体を使用しようするダウンストリームアプリケーションに焦点を合わせます。蛍光タグは主に細胞イメージング、フローサイトメトリー、蛍光ブロッティング、免疫蛍光アプリケーションで使用されますが、HRP や AP などの酵素タグは ブロッティング、ELISA、免疫組織化学のアプリケーションに一般的に使用されます。ビオチンなどのハプテンタグは、タンパク質の単離と精製、そして前述のアプリケーションのいずれかで使用できるため、使用可能なタグオプションの中でより用途が広いです。

AAT Bioquest社は、抗体やタンパク質標識キットの包括的な種類から選択できます。研究を始めたばかりのお客様を念頭に置いて設計されたこれらのキットは、最も簡単なプロトコルで、最小限の実務経験しか必要としません。

FC = flow cytometry; IF = immunofluorescence; IHC = immunohistochemistry; WB = Western blot; ELISA = enzyme-linked immunosorbent assay.

• 専用商品ページはこちら

ReadiLink™ Rapid 抗体標識キットは、抗体をマイクロスケールで標識できる便利なキットです。キットは精製工程を必要としない、簡単な混合工程のみの2ステップからなります。キットに使用されているiFluor™ や mFluor™ 色素のスクシンイミジルエステル (SE) は、タンパク質の脂肪族アミンとの良好な反応性・選択性を示し、天然のペプチド結合と同じカルボキサミド結合を形成します。iFluor™ もしくは mFluor™ で標識された抗体は、免疫蛍光染色、蛍光 in situ ハイブリダイゼーション、フローサイトメトリーといった適用に使用することができます。

特長

• モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、その他のタンパク質へ標識
• 早くて簡単な2段階のラベリングプロトコル、化学やコンジュゲーションの経験は必要ありません
• 抗体量 100 µg の標識が可能 (2種類の抗体各 50 µg にそれぞれ標識することも可能)
• 抗体回収率100 %、精製は不要
• コンジュゲートは1時間で使用でき、ハンズオンタイムはわずか10分
• iFluor™色素、mFluor™色素、AlexaFluor® と同等のAF色素、FITC、Cy3、Cy5、Cy7、BSA、KLHまたはビオチンから選択
• アミンを含むバッファー (トリスやグリシンなど) の使用は避けてください
• BSAと互換性のある抗体標識キットの場合は、ReadiLink™xtra Rapid Antibody Labeling Kitsを使用するため、安定化タンパク質 (BSAやゼラチンなど) を標識する前に除去する必要があります。

裁量の結果を得るための便利なデザイン

図1. ReadiLink™ antibody labeling ワークフロー

ReadiLink™ RapidAntibody Labelingキットは、アミン反応性標識を利用して、共有結合で標識されたコンジュゲートを調製します。これらの反応性標識は、目的の抗体上のリジン残基などの第一級アミンを選択的に標的にして結合します。抗体を標識するには、抗体溶液 (濃度〜1 mg / mL) を ReadiLink™反応バッファーと混合し、事前に調整した混合物を標識バイアルに加え、30〜60分間インキュベートします。 最後に、TQ™-Dyed Quench Buffer を混合物に加え、よく混ぜます。この部分は、バックグラウンド干渉とカラム精製ステップの両方を排除するために重要になっています。10分間のインキュベーション後、コンジュゲートは使用可能です。

高性能な代替品としての Lightning-Link®抗体ラベリングキット

		Labeling Kit CD4(SK3)- Conjugate Stain Index ReadiLink™ Kit CD4-iFluor™ 488 Conjugate 43 Lightning-Link® Kit CD4-Alexa Fluor® 488 Conjugate 26
		図2. ヒトPBMC細胞のフローサイトメトリー解析 ReadiLink™ RapidiFluor488 Antibody Labeling キット (品番：1255) またはLightning-Link® RapidAlexaFluor®488 で調製した抗ヒトCD4抗体を使用。FITCチャネルをセットしたACEANovoCyteフローサイトメーターで蛍光シグナルをモニターした。

• 専用商品ページはこちら

BSA互換性のあるReadiLink™xtra Rapid Antibody Labeling キットは、一次抗体の標識をまったく新しいレベルの利便性に導きます。特別に処方された標識と最適化された標識プロトコルを利用して、一般的なバッファー添加物や安定化タンパク質の存在下で、マイクログラム量の一次抗体を迅速で再現性のある標識を可能にします。わずか 2つの簡単なステップで、カラム精製なしで、免疫ベースのアプリケーションでの使用に適した抗体を共有結合で標識します。

特長

• BSA や他の安定化タンパク質と互換性があります
• モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、その他のタンパク質へ標識
• 抗体量 100 µg の標識が可能 (2種類の抗体各 50 µg にそれぞれ標識することも可能)
• 抗体回収率100 %、精製は不要
• コンジュゲートは1時間で使用でき、ハンズオンタイムはわずか10分
• iFluor™色素、mFluor™色素、AlexaFluor® と同等のAF色素、FITC、Cy3、Cy5、Cy7から選択

• 専用商品ページはこちら

Buccutite™クロスリンクテクノロジーは、西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）、アルカリホスファターゼ（AP）、またはフィコビリタンパク質でタンパク質と抗体を共有結合で標識する方法を提供します。従来の SMCC化学標識法などのタンパク質間相互作用の技術と比較して、Buccutite™コンジュゲーションは大幅に堅牢で簡単です。これらのキットを使用すると、マイクログラム量の抗体（標識反応あたりわずか25 µg）を2時間未満で最適に標識でき、精製は不要で、100 ％ の収率が得られます。Buccutite™ラベリングキットを使用して、一般的なイムノアッセイ（ELISA、IHC、ウエスタンブロットなど）またはフローサイトメトリーアプリケーションで一般的に必要とされる厳密な洗浄技術に耐える共有結合標識コンジュゲートを調製します。

特長

• 抗体量25 µg から 1 mgまでを標識
• HRP、AP、フィコエリトリン（PE）、アロフィコシアニン（APC）、PerCP、PEタンデム色素、APCタンデム色素から選択
• 精製を必要とせず、標識時間は2時間未満
• 抗体回収率 100 %

高性能な代替品としての Lightning-Link®抗体ラベリングキット

		Labeling Kit CD4(SK3)- Conjugate Stain Index Buccutite™ Kit CD4-PE Conjugate 55 Lightning-Link® Kit CD4-PE Conjugate 28
		図3. ヒトPBMC細胞のフローサイトメトリー解析 Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling キット (品番：1310) またはLightning-Link® PE で調製した抗ヒトCD4抗体を使用。FITCチャネルをセットしたACEANovoCyteフローサイトメーターで蛍光シグナルをモニターした。

【関連情報】

• CD抗体、及びその蛍光標識コンジュゲート
  (AAT Bioquest NEWS 2021年 3月号)

※  表示価格について