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定量PCRや高感度融解温度曲線（HRM）解析に最適 Fast-Plus EvaGreen® qPCR マスターミックス

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メーカー名：Biotium, Inc.

Fast-Plus EvaGreen® qPCRマスターミックスは、Ready-to-useのホットスタート酵素で、PCR 増幅の融解曲線分析や核酸定量にお使いいただけます。また、ROX reference dye の量の違いにより3種類のフォーマットをご用意していますので、様々なタイプのPCR装置でお使いいただけます。

マスターミックス中の色素EvaGreen® dye は、qPCR と高感度融解温度曲線解析（High Resolution Meltinganalysis: HRM）の両方に理想的なDNA結合色素です。

背景

EvaGreen® dye

EvaGreen® dye は、ユニークな“release-on-demane”メカニズムでdsDNA に結合し、PCRを阻害することなく、qPCRでの色素濃度の飽和状態を可能にします。

さらに、従来のDNA 結合色素よりも安全です。SYBR® Green I は広く使用されている色素ですが、エチジウムブロマイドよりも毒性が高く、突然変異原の１つとして知られています（Ohta, et al. Mutation Research, 492, 91-97（2001））。また、SYBR® Green I は、細胞内のDNA修復メカニズムに影響を与えると示唆されており、結果として、UV照射によるDNAダメージと同様の遺伝毒性を高めてしまいます。それに対し、EvaGreen® dye は細胞膜不浸透性を有していますので、生細胞内でのゲノムDNAへの接触を妨ぐことができます。

＊ビオチウム社では、EvaGreen® dye のセーフティレポートをご用意しています。

図1　EvaGreen® の細胞不浸透性

特長

EvaGreen® は細胞膜不浸透性を有しますので、従来の色素よりも安全な蛍光色素です（図1）。
ユニークなDNA結合メカニズム（release-on-demand）により、非常に優れたPCR／融解曲線解析結果が得られます（図2）。
Cheetah™ Taq は、ホットスタート酵素で活性までたったの2分です。
HRM及び通常のqPCRとFast qPCRの両方にお使いいただけます。
EvaGreen® はゲル染色試薬にもなりますので、ゲル電気泳動でPCR産物を解析する場合には、ゲル染色試薬を加える必要がありません。
EvaGreen® の吸収及び発光スペクトルはSYBR® GreenやFAMと類似していますので、同じ測定波長でお使いいただけます。

製品データ

図2　Fast-Plus EvaGreen® マスターミックスと他社qPCR用マスターミックスの性能比較
各マスターミックスは同一条件（増幅産物はヒトATPG、装置はABI 7900Fast）で試した。

マスターミックス選択ガイド

リアルタイムPCR装置別マスターミックス選択ガイド
品名／対応するリアルタイムPCR装置	構成内容	品番
Fast-Plus EvaGreen® Master Mix （no ROX） BioRad: iCycler, MyiQ, MiQ 2, iQ 5, CFX-96, CFX-384, MJ Opticon, Opticon 2, Chromo4, MiniOpticon Qiagen: Roto-Gene Q, Roto-Gene 3000, Roto-Gene 6000 Eppendorf : Mastercycler realplex Illumina: Eco RealTime PCR System Cepheid: SmartCycler Roche : LightCycler 480, LightCycler 2.0	EvaGreen® dye dNTP buffer composition（ including Tris and MgCl₂） Cheetah™ hot-start Taq polymerase	31020 31020-1 31020-2
Fast-Plus EvaGreen® Master Mix with Low ROX ABI： 7500, 7500 Fast Stratagene： MX4000P, MX3000P, MX3005P	EvaGreen® dye dNTP buffer composition （including Tris and MgCl₂） Cheetah™ hot-start Taq polymerase low concentration of ROX reference dye	31014 31014-1 31014-2
Fast-Plus EvaGreen® Master Mix with High ROX ABI： 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOne plus	EvaGreen® dye dNTP buffer composition （including Tris and MgCl₂） Cheetah™ hot-start Taq polymerase high concentration of ROX reference dye	31015 31015-1 31015-2

Fast-Plus EvaGreen® qPCR マスターミックス

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix	BTI	31020	2*1 ML [200 rxn]	￥49,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix	BTI	31020-1	5*1 ML [500 rxn]	￥107,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix	BTI	31020-2	50*1 ML [5000 rxn]	お問い合わせ
Fast Plus EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR with low Rox	BTI	31014	2*1 ML [200 rxn]	￥49,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix with low Rox	BTI	31014-1	5*1 ML [500 rxn]	￥107,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix with low Rox	BTI	31014-2	50*1 ML [5000 rxn]	お問い合わせ
Fast Plus EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR with high Rox	BTI	31015	2*1 ML [200 rxn]	￥48,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix with high Rox	BTI	31015-1	5*1 ML [500 rxn]	￥107,000
Fast Plus EvaGreen^(R) qPCR Master Mix with high Rox	BTI	31015-2	50*1 ML [5000 rxn]	お問い合わせ