フローサイト／顕微鏡／プレートリーダーを蛍光検出！ OxiSelect™ 細胞内の一酸化窒素（NO）測定キット

細胞内一酸化窒素アッセイキットは、培養細胞中の一酸化窒素（NO）または一酸化窒素合成酵素（NOS）活性をすばやく検出するためのキットです。

キットに含まれる蛍光プローブは、NOに特異的で、優れた光安定性・pH安定性を持ち、標準のフルオレセインフィルターで検出できます。フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡、蛍光マイクロプレート検出に適用できます。96サンプルを試験するのに十分な量の試薬が含まれています。

RNS と 一酸化窒素（NO）について

活性窒素種（RNS：Reactive nitrogen species）と活性酸素種（ROS：reactive oxygen species）は、共同で機能して細胞に損傷を与え、いくつかの疾病の発病に関与しているとされています。

RNSは、一酸化窒素（NO）とスーパーオキシドアニオン（O^2-）に由来する分子のファミリーに属します（それぞれ一酸化窒素合成酵素（NOS）、NADPHオキシダーゼによって生成されます： 図1）。一酸化窒素は、血管系の疾病、糖尿病、腎臓虚血、アテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、ガンなどを媒介することが確認されています。しかしながら、その極端に短い半減期のために、NOの生理的機能についての研究は困難でした。

図1　NOおよびRNSの生成につながる反応

• 培養細胞中の細胞内一酸化窒素（NO）または NOS活性 をすばやく検出
• 一酸化窒素に特異的な蛍光プローブは、光やpHに安定
• フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡、蛍光マイクロプレート検出に適用
• 一酸化窒素の検出限界は3nM

• NOS阻害剤（L-NNA）
• 細胞溶解バッファー（5×）
• 一酸化窒素蛍光プローブ（500×）

図2　測定原理
細胞透過性の一酸化窒素プローブが、細胞内に拡散し、細胞のエステラーゼにより脱アセチル化されて非蛍光の中間体に変換される。

細胞内の一酸化窒素がこの中間体に遭遇すると、中間体は急速に酸化され、トリアゾロフルオレセインアナログとなって強い蛍光を発する。蛍光強度は細胞質内のNOレベルに比例する（検出感度：〜3nM）。

図3　RAW264.7細胞のNOS誘導 （蛍光プレートリーダー測定）
RAW246.7細胞を96ウェルプレートに1ウェル当たり100,000細胞播き、37℃で20時間インキュベートした。
左：NOS誘導なし
中：インキュベート時に50ng/mL LPSおよび10ng/mL IFN-γでNOSを誘導
右：NOS誘導後、L-NNA（NOS阻害剤）処理

図4　RAW264.7細胞のNOS誘導 （蛍光顕微鏡検出）
RAW246.7細胞を96ウェルプレートに1ウェル当たり100,000細胞播き、37℃で20時間インキュベートした。
左：NOS誘導なし
右：インキュベート時に50ng/mL LPS及び10ng/mL IFN-γでNOSを誘導

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