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記事ID : 11049
研究用

比色法または蛍光法で簡単定量!OxiSelect™ In vitro 一酸化窒素(NO)測定アッセイ

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In vitro 一酸化窒素測定アッセイキットは、一酸化窒素(NO:Nitric Oxide)の酸化産物である亜硝酸塩(NO2-)/硝酸塩(NO3-)測定によって、トータル一酸化窒素を定量するキットです。

硝酸塩(NO3-)を亜硝酸塩(NO2-)に硝酸還元酵素で変換後、比色法:グリース法(図2B) または 蛍光法:DAN (2,3-ジアミノナフタレン)試薬(図2C)で検出します。多様なサンプル(血清、血漿、尿、唾液、ライセート、培地)にご使用いただけます。

背景

一酸化窒素(NO)の測定

反応性窒素中間体(RNI:Reactive nitrogen intermediates)および反応性酸素中間体(ROI:reactive oxygen intermediates)は、共同で機能して細胞に損傷を与え、いくつかの疾病の発病に関与しているとされています。RNIは、一酸化窒素(NO)とスーパーオキシドアニオン(O2-)に由来する分子のファミリーに属します(それぞれ一酸化窒素合成酵素(NOS)、NADPHオキシダーゼによって生成されます)。

一酸化窒素は、血管系の疾病、糖尿病、腎臓虚血、アテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、がんでの確立されたメディエーター(化学伝達物質)です。しかしながら、その極端に短い半減期のために、NOの生理的機能についての研究は困難でした。そのため、トータルNOを測定する一般的な方法は、一酸化窒素(NO)の最終酸化産物である亜硝酸塩(NO2-)と硝酸塩(NO3-)を合計することで算出されています(図1)。

L-アルギニンの硝酸への酸化
図1.L-アルギニンの硝酸への酸化

使用目的

本キットは、様々なサンプルのNO濃度を定量するための簡単なアッセイです。

アゾ色素として540nmの吸光度を測定
蛍光プローブの反応

図2.測定原理
A: 硝酸還元酵素により硝酸塩を亜硝酸塩に変換
[比色法:品番STA-802] → B: グリース反応
[蛍光法:品番STA-801] → C: 蛍光プローブDANの反応

硝酸還元酵素によりサンプル中の硝酸塩(NO3-)を亜硝酸塩(NO2-)に変換します(図1A)。
蛍光法(品番STA-801):トータル亜硝酸塩量を蛍光プローブDAN(2,3-ジアミノナフタレン)で検出し、蛍光(Ex:360-365nm/Em:430-435nm)を測定します(図1C)。

特長

  • 高感度:検出限界: 2μM
  • 適用サンプル: 血清、血漿、尿、唾液、ライセート、培地

構成内容

【比色法: 品番 STA-802
  • 亜硝酸塩スタンダード
  • 硝酸塩スタンダード
  • 酵素混合液
  • 酵素コファクター
  • グリース試薬A
  • グリース試薬B
【蛍光法: 品番 STA-801
  • 亜硝酸塩スタンダード
  • 硝酸塩スタンダード
  • 亜硝酸アッセイバッファー
  • トータル亜硝酸/硝酸アッセイバッファー
  • 酵素コファクター
  • DAN蛍光プローブ(10×)
  • 蛍光プローブ希釈液(2×)
  • 停止液
 

使用例

左:亜硝酸塩のスタンダードカーブ 右:硝酸塩のスタンダードカーブ
図2 スタンダードカーブの例(比色法: 品番STA-802)
左:亜硝酸塩のスタンダードカーブ
右:硝酸塩のスタンダードカーブ

スタンダードカーブの例(蛍光法: 品番STA-801)
図3 スタンダードカーブの例(蛍光法: 品番STA-801)
左:亜硝酸塩のスタンダードカーブ
右:硝酸塩のスタンダードカーブ

In vitro 一酸化窒素アッセイ

• 比色法

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM In Vitro Nitric Oxide (Nitrite / Nitrate) Assay Kit (Colorimetric)詳細データ CBL STA-802 100 ASSAY
¥67,000
OxiSelectTM In Vitro Nitric Oxide (Nitrite / Nitrate) Assay Kit (Colorimetric)詳細データ CBL STA-802-5 5*100 ASSAY
¥297,000

• 蛍光法

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM In Vitro Nitric Oxide (Nitrite / Nitrate) Assay Kit (Fluorometric)詳細データ CBL STA-801 100 ASSAY
¥75,000
OxiSelectTM In Vitro Nitric Oxide (Nitrite / Nitrate) Assay Kit (Fluorometric)詳細データ CBL STA-801-5 5*100 ASSAY
¥314,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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