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研究用

DCFH-DiOxyQプローブで活性を蛍光測定OxiSelect™ In Vitro ROS/RNS アッセイ

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生細胞をサンプルとした活性酸素種(ROS)活性測定試薬がほとんどの中、本商品は調製した多様な生体液試料(血清、血漿、尿、細胞ライセート、培養細胞上清)のトータル活性酸素種(ROS)/活性窒素種(RNS)フリーラジカルを測定できます。

蛍光プローブに独自の DCFH-DiOxyQ(DiOxyQ) プローブを採用しており、蛍光プレートリーダーで蛍光検出(480 nm / 530 nm)します。本キットは、フリーラジカルに対する抗酸化物質の評価にも有用です。

特長

  • H2O2、NO、ROO、ONOO-を含む全てのROSおよびRNSを測定可能です。
  • 血清、血漿、尿、細胞ライセート、培養細胞上清に適しています。
  • 限界検出感度は、DCFは10pM、H2O2は40nMです。

構成内容

  • プライミング試薬
  • 安定剤
  • 触媒
  • DCF-DiOxyQ
  • DCF スタンダード
  • 過酸化水素水

アッセイ原理

蛍光プローブに独自の消光プローブ DCFH-DiOxyQ(DiOxyQ) を採用しています。原理としては、まずDCFH-DiOxyQを消光除去試薬で処理し、その後安定化させて高い反応性のDCFH 型にします。この反応段階で、DCFHはROSやRNSと反応し、DCFHは急速に酸化されてDCFとなり蛍光を発します(図1)。蛍光強度は、サンプル中のトータルROS/RNS量に比例します。DCFH-DiOxyQプローブは過酸化水素(H2O2)、ペルオキシルラジカル(ROO)、一酸化窒素(NO)、ペルオキシ亜硝酸(ONOO)と反応可能です。これらのフリーラジカル分子はROSおよびRNSを代表しています。検出感度はDCFに対して10pM、H2O2に対して40nMです。

 

DCFH プローブを利用したアッセイ原理

図1.アッセイ原理
  1. 未知のROSあるいはRNSサンプル、およびスタンダードを、酸化反応を加速する触媒と共にウェルに添加します。
  2. 短時間インキュベーション後、全てのウェルに用意したDCFH プローブを添加し、酸化反応を開始します。
  3. 通常の蛍光プレートリーダーで測定します。未知サンプル内のフリーラジカル含有量は、あらかじめ定められたDCFあるいは過酸化水素標準曲線と比較して決定します。
 

使用例

DCFの検量線
図2.DCFの検量線

本キットによるフリーラジカル種の検出
図3.本キットによるフリーラジカル種の検出
左:ペルオキシラジカル、水:ペルオキシ亜硝酸

よくある質問 Q&A

【01】 Intracellular ROS アッセイ(品番:STA-342)と In Vitro ROS アッセイ(品番:STA-347)の違いは?

主な違いは適用サンプルです。

Intracellular ROS アッセイ(品番:STA-342)は、培養細胞をアッセイします。細胞透過性のDCFH-DAは、細胞に添加され、細胞内エステラーゼによって加水分解され、DCFHとなります。一旦、ROSによって酸化されると、DCFHは、蛍光のDCFとなります。DA基を除去するのにエステラーゼ活性を必要とするため、Intracellular ROS アッセイは生細胞または組織に対してのみ有効です。

一方、In Vitro ROSアッセイ(品番:STA-347)は、細胞/組織ライセート、血液、尿に使用されます。In Vitro ROSアッセイキット(品番:STA-347)は、活性型のエステラーゼと染色液が細胞膜を透過する必要がありません。

下記よりそのほかのFAQもご覧いただけます。

OxiSelect™ In Vitro ROS/RNS アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence)詳細データ CBL STA-347 96 ASSAY
¥95,000
OxiSelectTM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence), Trial Size詳細データ CBL STA-347-T 20 ASSAY
¥48,000
OxiSelectTM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence)詳細データ CBL STA-347-5 5*96 ASSAY
¥399,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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