記事ID ： 44360

CD9+やCD81+エクソソームをラベルフリーで単離可能 CD9/CD81 Fab-TACS® Exosome Agarose Column Starter Kit

メーカー名：IBA GmbH

細胞培養液、血清や血漿から、CD81+もしくはCD9+のエクソソームをラベルフリーで精製できます。

【目次】

特長
原理
商品ラインアップ

特長

高純度
ターゲットへの可逆的な結合
完全な機能を保持したエクソソームを精製
低親和性Fab fragmentによるラベルフリーなエクソソーム精製
超遠心がいらない短時間かつシンプルなプロトコール

原理

エクソソーム精製のためのStrep-tag®技術

Strep-tag®技術は、アフィニティクロマトグラフィーによって表面マーカーを検出することで、ラベルフリーのエクソソーム精製を可能にします。
この技術はエクソソーム精製用Fab-TACS®と呼ばれるトレースレスアフィニティエクソソーム単離方法です。「Fab」は、本方法で使用する抗体由来のFabフラグメントから派生したものです。FabはTwin-Strep-tag® (Fab-Strep)および、エクソソーム表面マーカーに特異的に結合します。

Twin-Strep-tag®は、人工ストレプトアビジンであるStrep-Tactin®とFab-Strepの結合を促進します。Strep-Tactin®でコーティングしたアガロースマクロビーズを含むカラムに、Fab-Strepをロードすることで、アフィニティクロマトグラフィーを使用したエクソソーム精製が可能です。そのため、細胞上清や血漿などのサンプルからのエクソソーム精製に適しています。

エクソソーム用Fab-TACS®は、Fab-Strepの低親和性とTwin-Strep-tag®とStrep-Tactin®の可逆的な結合という二つの要因によって、すべての標識試薬が除去可能です。
Fab fragmentは、ターゲットとのみ弱く結合するため、エクソソームと十分に結合するためには、カラム内でのStrep-Tactin®とFab-Strepsの多量体形成によってavidity（結合力）をあげることが必要です。この反応はビオチン添加によって巻き戻されます。ビオチンとStrep-Tactin®の親和性が高いため、ビオチンはTwin-Strep-Tag®に代わりStrep-Tactin®に結合します。これにより、Fab-Strepと共にエクソソームが解離します。更に、Fab-Strepはエクソソームとの親和性が低いためエクソソーム表面から自然に解離し、その結果、完全にラベルフリーのエクソソームが得られます。
本精製プロトコルはエクソソームへの影響がほとんどなく、精製後のウエスタンブロットやnanoparticle tracking analyses (NTA)、細胞培養実験等に適しています。

Exosome Isolation with Fab-TACS®
Fab-TACS®技術によるエクソソーム単離方法を動画でご確認頂けます。

Fab-TACS®は、低親和性のFab fragmentを用いたイムノアフィニティクロマトグラフィー代替法であり、エクソソームの機能に影響を与えることなく捕捉・遊離することができます。Strep-tag®技術の可逆的な結合特性に基づいて、Fab fragmentはエクソソームの表面タンパク質を標的とし、ビオチンの添加後に自発的に解離します。分離されたエクソソームは完全にラベルフリーで機能的であり、様々なダウンストリームアプリケーションに適しています。

商品ラインアップ

Fab-TACS Exosome Agarose column Starter Kit

Fab-TACS®は、当社のStrep-tag®技術に基づくトレースレスアフィニティエクソソーム単離方法です。Fab-TACS® Exosome Agarose Column Starter Kitは、血漿、血清、細胞培養上清からヒトCD9+（品番：6-3319-002）もしくはCD81+（品番：6-3381-002）エクソソームをラベルフリーで単離することができます。

【構成品】

Strep-Tactin® TACS Agarose columns
CD9 Fab-Strep, human（品番：6-3319-002）or CD81 Fab-Strep, human（品番：6-3381-002）
Biotin stock solution
TACS Column Adapter

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
CD9 Fab-TACS^(R) Exosome Agarose column Starter Kit, Human	IBA	6-3319-002	1 KIT	販売終了
CD81 Fab-TACS^(R) Exosome Agarose column Starter Kit, Human	IBA	6-3381-002	1 KIT	販売終了

Strep-Tactin®TACS Agarose Column

Strep-Tactin® TACS Agarose columnsは、ストレプトアビジンバリアントのStrep-Tactin®でコーティングされたアガロースマクロビーズを使用しています。特殊な架橋により、細胞の分離や除去などに使用することができます。本カラムは、Traceless Affinty Cell Selection（Fab-TACS®/Nano-TACS®）用に開発されました。
この方法は、Twin-Strep-tag®（Fab-Streps）またはナノボディ（Nano-Streps）と融合したFabフラグメントがアガロースマトリックス上のStrep-Tactin®に結合します。細胞を特異的に捕捉した後、ビオチン添加によりFab-/Nano-StrepはStrep-Tactin®アガロースから放出されます。細胞はFab-/Nano-Strepと解離し、ダウンストリームアプリケーションに適した状態になります。この原理はエクソソームの分離にも使用可能です（Fab-TACS® for exosomes）。Fab-Strep/Nano-Strepの代わりに、Twin-Strepタグ付き抗体、デスチオビオチン化抗体、ビオチン化抗体（不可逆的結合）をカラムにロードすることも可能です。これにより、Strep-Tactin® TACS Agaroseカラムはネガティブセルセレクションやデプリーションアプローチにも適しています。

【仕様】

細胞結合限界：2×10⁷ (品番：6-6310-300) or 1×10⁸ (品番：6-6310-001) target cells
ご提供形態：Pre-packed in buffer
アプリケーション：アフィニティクロマトグラフィー or エクソソーム精製
支持体：Crosslinked agarose

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Strep-Tactin^(R) TACS Agarose Column	IBA	6-6310-300	0.3 ML	￥20,000
Strep-Tactin^(R) TACS Agarose Column	IBA	6-6310-001	1 ML	￥37,000

Strep-Tactin®TACS Agarose

本製品はカラムアフィニティクロマトグラフィーに最適化されているため、懸濁液はグラビティフローカラムの充填に使用することができます。1mlの樹脂床容積のカラムに充填するには、2 mlの50％懸濁液が必要です。

【仕様】

ビオチン結合限界：> 40 nmol/ml resin
ご提供形態：50% 懸濁液
アプリケーション：アフィニティクロマトグラフィー or エクソソーム精製
支持体：Crosslinked agarose

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Strep-Tactin^(R) TACS Agarose	IBA	6-6350-002	4 ML	￥45,000
Strep-Tactin^(R) TACS Agarose	IBA	6-6350-010	20 ML	￥139,000
Strep-Tactin^(R) TACS Agarose	IBA	6-6350-025	50 ML	￥314,000

Fab-Strep

CD9（CD81）Fab-Strepは、Twin-Strep-tag®に融合した組換え発現の低アフィニティFab fragmentです。Fab-Strepは、IBA GmbH社のStrep-tag®技術に基づくTraceless Affinity Cell Selection（Fab-TACS®）用に開発されました。ターゲットに対する親和性が低いため、細胞やエクソソーム表面への十分な結合を確保するためには、avidity（結合力）の向上が必要です。Fab-StrepをStrep-Tactin®と組み合わせることで、細胞やエクソソームに安定的に結合する複合体を形成することができます。

【仕様】