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広い温度範囲でcDNA合成が可能 Bio-Helix社 cDNA合成関連商品

メーカー名：Bio-Helix CO., LTD.

Bio-Helix社では、広い温度範囲で使用可能なcDNA合成キットや逆転写酵素を販売しております。

RScript Reverse Transcriptase
RScript cDNA Synthesis Kit
RIBOAssure RNase Inhibitor

RScript Reverse Transcriptase

RScript Reverse Transcriptaseは、革新的な設計によりcDNA合成のあらゆるニーズを満たし、最も困難なRNAの二次構造を広い温度範囲で増幅することができます。Bio-Helix社の次世代型遺伝子組み換えM-MLV逆転写酵素は、耐熱性、加工性、堅牢性、最適なcDNA収率、RNase H活性を低下させる独自の部位変異、および半減期の延長を改善し、通常のcDNA合成の要件を満たすだけでなく、難しいRNAサンプルに対しても優れた性能を発揮する汎用性の高い逆転写酵素です。

特長

難易度の高いCOVID-19 RNAの検出に優れた逆転写酵素です
37℃で21日間以上保存しても酵素活性が安定しています
42℃から60℃までの耐熱性が向上しています

製品データ

図1. RScript Reverse Transcriptaseの安定性
RT-qPCRのデータから、37℃で3週間（21日）経過しても性能に大きな変化がなく維持されており、RScript Reverse Transcriptaseは温度や時間に対する高い安定性を有していることが分かる。RScript Reverse Transcriptaseの活性の割合は、各反応温度での値を除算して算出した。

図2. 耐熱性の向上
RScript Reverse Transcriptaseまたは他社製逆転写酵素を用いて、1kbの断片ARHGAP29 RNAを逆転写した。RScript の逆転写酵素は、温度変化（42 - 60℃）にかかわらず、他社品と比較して、60℃までの高温で安定した優れた性能を発揮することがわかった（A:Bio-Helix RScript reverse transcriptase（品番：RT001-0050 / RT001-0250）、B: A社逆転写酵素、C: B社逆転写酵素 D: C社逆転写酵素）。分子量マーカーは、DNA Ladder 1kb（品番：SDL-1000R）を使用した。

図3. 11kbの鋳型RNAの伸長反応
RScript Reverse Transcriptaseを用いて、様々なヒト膀胱癌細胞株-5637（HTB-9）のRNAと反応させた。得られた合成cDNA（8kb ,11kb）をPCRで増幅し、2%アガロースゲルで可視化した。分子量マーカーは、DNA Ladder 1kb（品番：SDL-1000R）を使用した。

図4. RScript Reverse Transcriptaseを使用したOne-Step RT-qPCR
COVID-19フラグメントの逆転写性能を評価するために、1反応あたり100コピーのN1遺伝子をOne-Step RT-qPCRでテストした。その結果、実行可能かつ効果的であることが証明された（平均Ct : 34.88）。COVID-19フラグメントは、Twist Synthetic SARS-CoV-2 RNA Controls (品番：EPI-ISL-1662307)から入手した。

図5. RScript Reverse Transcriptaseを使用したRT-qPCR
55℃の温度で、RScript Reverse Transcriptaseはより優れた効率とより高いcDNA収量を示します。RScriptの逆転写酵素は、他社品と比較して、55℃で安定した優れた性能を発揮します。そのため、RScript Reverse Transcriptase（Red）は、A社逆転写酵素（Green）やC社逆転写酵素（Blue）と比較して、cDNA量が少ないため、Ct値が著しく高くなることはない。

RScript cDNA Synthesis Kit

RScript cDNA Synthesis Kitは、革新的な設計によりcDNA合成のあらゆるニーズを満たし、最も困難なRNAの二次構造を広い温度範囲で増幅することができる最新のキットです。RScript cDNA Synthesis Kitは、Bio-Helix社の次世代型遺伝子組み換えM-MLV逆転写酵素を含んでおります。この酵素は、耐熱性、加工性、堅牢性、最適なcDNA収率、RNase H活性を低下させる独自の部位変異、および半減期の延長を改善し、通常のcDNA合成の要件を満たすだけでなく、難しいRNAサンプルに対しても優れた性能を発揮する汎用性の高い逆転写酵素です。

製品データ

図.
RScript cDNA Synthesis Kitを用いて、330bpのCCD1A RNAを逆転写した。PCRのデータから、RScript cDNA Synthesis Kitは高温でも安定して優れた性能を発揮することがわかる。

RIBOAssure RNase Inhibitor

RIBOAssure RNase Inhibitorは、大腸菌で発現するヒト胎盤タンパク質として、RNase A、RNase B、RNase Cなどの真核生物酵素が示すリボヌクレアーゼ（RNase）活性を非共有結合により阻害します。RNA分離、cDNA合成、RT-PCR、in vitro転写・翻訳、RNaseフリーのモノクローナル抗体作製など、最適なRNA品質や実験結果を得るためにRNaseの存在が好ましくない際にご使用ください。RNase Inhibitorは、RNase 1、RNase T1、RNase T2、S1 nuclease、RNase Hに対する活性がありません。その後の実験ステップやアプリケーションでは、Bio-Helix社の高性能RScript Reverse Transcriptase、qPCR MasterMix、Taq DNA polymerase、2X PCR SuperMixと併用することを強くお勧めします。