わずか1ngのtotal RNAインプットからライブラリを調製可能 CORALL RNA-Seq V2 Library Prep Kit

CORALL Total RNA-Seq V2 Library Prep Kitは、Lexogen社が新たに開発したTotal RNA ライブラリ調製キットで、whole transcriptomeをカバーします。CORALLはイルミナ社機器に対応するライブラリを4.5時間以内に調製可能で、Unique Molecular Identifiers (UMIs)が併用可能な点、高いストランド特異性（>99%）が特長です。Lexogen社独自のDisplacement Stop / Ligation技術を採用しており、ライブラリ調製の過程で断片化が不要で、転写開始点、転写終結点を含む完全なライブラリが得られます。

• 転写開始点から終結点までの全長RNAを対象としたライブラリ調製
• 断片化処理が無く、ライブラリ長が安定
• 幅広いRNAインプット量に対応（0.1 ng 〜 1 µg total RNA）
• 4.5 時間以内で完了
• ストランド特異的な解析（＞ 99%）
• 分解サンプルやFFPE サンプルも解析可能
• 12 nt Unique Dual Indices（UDIs）とUnique Molecular Identifiers (UMIs)が付属

CORALLライブラリは、わずか1ngのtotal RNAインプットから調製可能です。様々な生物種の解析に使用でき、rRNA除去RNA、poly(A)濃縮RNA、total RNA、FFPE組織由来RNA等の様々なRNAサンプルに対応しています。ライブラリ調製では、RNAの断片化は不要で、まず、イルミナ社機器対応のP7配列の一部を含むDisplacement Stop Primers (DSP) が試料RNAにランダムプライミングします。次に、逆転写反応によりDSPを次のDSP結合位置まで伸長させます。次のDSP結合位置で伸長が止まることで、誤った第二鎖合成を防ぎ、ストランド特異性を向上させます。その後、リンカーオリゴがcDNAの3’末端に結合し隙間を埋めます。
PCRステップでは、第二鎖合成が行われ、二本鎖cDNAが得られます。この過程で、イルミナ社機器でシークエンス解析する際に必要なi7インデックスやi5インデックス（オプション）を含むアダプター配列がライブラリに付加されます。精製ステップでは磁気ビーズを用いており、自動化にもおすすめです。
CORALL は最大 384 種類の pre-mixed i5 / i7 Unique Dual Indices（UDIs）と一緒に利用可能で、UDIs はインデックスエラーの修正に有用です。オプションとして、i7 インデックスを利用したシングルインデックスにてマルチプレックス化可能です。UMIs の情報は Read 1 に含まれるため、シングルリードモードで解析可能です。RiboCop rRNA 除去キ ットとのセット品もご用意しています。

図2： 少量RNAでの優れた性能
A) 1 ngのUniversal Human Reference RNA（UHRR）サンプルをCORALL mRNA-Seq V2で2回処理した結果、非常に高い再現性が確認された。
B) CORALL mRNA-Seq V2およびCORALL Total RNA-Seq V2における1 ng input RNAのRead分布。

図3： 幅広いinput量に対応可能
CORALL mRNA-Seqで1 ngと1000 ngのUHRRから長いインサートを持つlibraryを作製した。検出された遺伝子の数を、ユニークにマッピングされたエクソンリードの総数に対してプロットしました。

図4：FFPEサンプルに対する高いパフォーマンス
新鮮凍結（Fresh Frozen）およびFFPE由来のヒト肝臓RNAの遺伝子発見率。
A) 検出された遺伝子の数を、エクソンにユニークにマッピングされたリードの総数に対してプロットした。
B) 検出された遺伝子の重複をベン図で表した（normalized expression levels >5 CPM）

rRNAは全RNAの80〜90%を占めるため、rRNAを解析に含めない場合はmRNA-seqまたはTotal RNA-seqの使用を推奨します。

使用する機器とサンプル数に応じて、UDIセットを選択してください。

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