簡便なプロトコールで細胞を常温・冷蔵保存可能 CytoStor™ 細胞保存・輸送用ハイドロゲル

CytoStor™はBeadReady™と同様の細胞保存能を保持しつつ、より簡便で、拡張性に優れたハイドロゲルです。Atelerix社が特別に調合したハイドロゲルと細胞を混合し、保存用バイアルに移すだけのシンプルなワークフローで、細胞を保存できます。貴重な細胞をその場でカプセルに封入し、細胞の保存と輸送の準備をすぐに整えることが可能です。CytoStor™は常温または冷蔵で最長2週間保存可能で、凍結による細胞へのダメージを回避できます。

• Atelerix社 細胞保存・輸送用ハイドロゲル 商品一覧

• ハイドロゲルのカプセルに細胞を素早く封入
• 拡張性に優れ、自動化可能
• 最長2週間保存可能
• 細胞を凍結せず、DMSO freeで保存・輸送が可能

準備

以下の試薬・器具はキットに含まれておりませんので、事前にご準備ください。

• 1000 µLマイクロピペット、チップ
• 細胞培養培地

手順

●ゲル化

• 使用前にすべてのコンポーネントが室温に戻っていることを確認する。また、以降のクリーンベンチ内のステップは室温で実施する。
• サンプルあたり0.48 mLの培地に、希望するカプセル化細胞濃度に対して2倍の細胞濃度になるように細胞を懸濁する。

  推奨細胞密度

  細胞直径	細胞タイプ	推奨細胞数
  4-10 µm	リンパ球（T細胞など）	≤ 1 x108 cells
  11-15 µm	線維芽細胞、CHO細胞、HEK細胞	≤ 5 x107 cells
  16-30 µm	間葉系幹細胞、単球、肝細胞	≤ 1 x107 cells

• Gel A (5x)が入ったチューブに細胞懸濁液を直接添加しGel Aを5倍希釈する。均一になるまでピペットで穏やかに混合し、気泡が混ざっていないことを確認する。
• CytoStor Vialに細胞とGel Aの混合物を0.6 mL添加する。チューブに蓋をして、ビーズがゲル全体に均一に分散するまで穏やかに転倒混和する。チューブを優しくはじいて内容物を落ち着かせ、チューブをしっかりと密封する(ゲルは約30分以内に硬化し、サンプルは1時間後に輸送可能)。
• 細胞に適した温度で、遮光保存する。

  推奨保存温度と保存期間

  細胞タイプ	推奨保存温度	保存期間
  末梢血単核細胞	2-8 ℃	3日
  Jurkat細胞	15-25 ℃	14日
  間葉系幹細胞	15-20 ℃	21日
  単球	15-20 ℃	5日
  線維芽細胞	15-20 ℃	14日

●リリース

• 使用前にすべてのコンポーネントが室温に戻っていることを確認する。また、以降のクリーンベンチ内のステップは室温で実施する。
• ピペットまたはシリンジで1 mL の Dissolution Buffer をゲルに加える。
• チューブに蓋をして、時々転倒混和するか、穏やかに撹拌して10分間ゲルを溶解させる。
• 完全な細胞懸濁液を直接使用するか、350RCFで5分間遠心分離して細胞を沈降させ、上清を除去し、最適な培地に細胞を再懸濁する。

ヒト脂肪由来 間葉系幹細胞とHela細胞

CytoStor™はBeadReady™と同等の細胞保護作用を持ち、室温（20℃）7日間の保存において、80％以上の細胞生存率を保持した。

図1. ヒト脂肪由来間葉系幹細胞における保存後の細胞生存率および生細胞数
ヒト脂肪由来間葉系幹細胞をBeadReady™、CytoStor™、培地を用いて室温（20℃）で7日間保存し、細胞を播種する前に、細胞生存率と生細胞数を計測した。

図2. Hela細胞における保存後の細胞生存率および生細胞数
Hela細胞をBeadReady™、CytoStor™、培地を用いて室温（20℃）で7日間保存し、細胞を播種する前に、細胞生存率と生細胞数を計測した。

ヒト鼻腔上皮細胞

CytoStor™で保存したヒト鼻腔上皮細胞は培地で保存した場合と比較して、2-8℃、14日間の保存において、最大2.6倍の細胞生存率および最大4.7倍の生細胞数を示した。

図3. ヒト鼻腔上皮細胞における保存後の細胞生存率および生細胞数
ヒト鼻腔上皮細胞をCytoStor™および培地で、2-8℃で7日間および14日間保存し、それぞれ細胞を播種する前に、細胞生存率と生細胞数を計測した。

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