人工合成蛍光タンパク質および発色性タンパク質発現ベクター ATUM社 Protein Paintbox^®

ATUM社(旧DNA2.0社)では、オワンクラゲに由来しない発色性タンパク質および蛍光タンパク質の発現ベクター「Protein Paintbox^®」を販売しております。

蛍光および発色性のタンパク質は、遺伝子導入システムのレポータからバイオセンサまで様々な研究目的に有用なツールです。しかしながら、明るさ、周波数域の特性、オリゴマーの状態、環境条件への感受性といったタンパク質の特性だけでなく、膨大な知的所有権のもつれにより、蛍光/発色性タンパク質の選択肢が狭まっているのが現状でした。

ATUM社では、Genbankより得た配列情報について配列相違性を最小化するとともにタンパク質の高発現を目指し、GeneDesignerソフトを用いてGeneGPS由来のE.coli コドンバイアスを一致させ再翻訳し、各遺伝子を断片化して生成できるようオリゴをデザイン発色/蛍光を示す新規タンパク質群を大量に構築しました。

オワンクラゲに由来しない蛍光および発色性タンパク質は、PCR増幅、制限酵素を用いた切り出し、または他の発現ベクターへのクローニングなど、コントロール用タンパク質コード配列（遺伝子）として理想的です。これらのベクターは発現ベクターやポジティブコントロールとして、タンパク質誘導のモニタリングにもご利用頂けます。

遺伝子導入システムのレポータからバイオセンサまで様々な研究目的に

• 多彩な選択肢：
  E.coli、哺乳類、酵母で使用できるようさまざまなプロモータのベクター骨格から選択
• 蛍光タンパク質：
  CFP, GFP,OFP, RFP, YFP
• 発色性タンパク質：
  水色, シアン, 橙, 桃色, 紫, 青紫, 青緑

発色性タンパク質一覧

特性

ベクターマップ

図1. ベクターマップ

蛍光タンパク質一覧

特性

図2. 蛍光Protein Paintbox^® の励起と発光スペクトル

ベクターマップ

図3. ベクターマップ

検証データ1：宿主：E-coli
- 単一E.coli 株におけるKringleYPEとClindyLouCFPの二重発現

ラムノース誘導型プロモータに制御されたKeingleYFP （黄色蛍光タンパク質） とT5 プロモータに制御されたCindyLouCFP（シアン蛍光タンパク質）を単一株に同時に形質転換する。２種のベクターシステムからのKringleYFPとCyanCFP のオルソゴナルな発現を示した。

• 2つのpDAUGHTER ベクターへのYFP とCFP のクローニング：rham_YFP とT5_CFP
• 単一株内でのYFP とCFP のオルソゴナルな発現
• 干渉なし：独占的な発現
• ラムノースによる制御可能な誘導
• Rham とT5 プロモータからの同等の発現

図4. 単一E.coli 株におけるKringleYPEとClindyLouCFPの二重発現

検証データ2：宿主：哺乳動物細胞 piggyBac
- IRESを用いたHEK₂₉₃細胞におけるCometGFPとRudolphRFPのバイシストロニックな発現

図5. RudolphRFPとCometGFPをHEK293細胞内で同時発現
重ね合わせた図では黄色に見える。

図6. 2Aを用いたHEK293細胞におけるCometGFPとRudolphRFPのバイシストロニックな発現
CometGFPは核局在性シグナルをもつため核内に移行する。RudolphRFPは細胞質のcaax シグナルをもち、細胞質内で発現する。GFPの核内局在化（緑色）とRFPの細胞質局在化（赤色、緑色 の核を包囲）が観察でき、２種の蛍光タンパク質の分離が確認できた。

• Protein Paintbox^® の開発

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