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パラフィン包埋組織中の標的を可視化可能な、新たなDNA in situ hybridization技術 DNAscope™ DUPLEX ASSAY

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メーカー名：Advanced Cell Diagnostics, a brand of Bio-Techne Corporation

現在の市販のFISH技術は蛍光核染色を使用しているため、形態学的な詳細さに欠け、遺伝子再構成やコピー数変化のシグナルを可視化するには、高価な高解像度顕微鏡を必要とします。さらに、細菌人工染色体（BAC）クローンを用いたプローブは、サイズが大きく、複数の遺伝子にまたがる傾向があるため、単一遺伝子の検出特異性が低く、DNA研究の発展が制限されていました。
この制限を克服するため新たなDNA in situ hybridization技術、DNAscope™が開発されました。
DNAscope™は、RNAscope™で実績のあるプローブデザインとシグナル増幅システムを採用しており、DNA 標的に対して迅速かつ柔軟なプローブ開発が可能で、パラフィン包埋組織中の標的を可視化することが可能です。

【目次】

ワークフロー
解析例
プロトコル
必要な試薬と機器
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ワークフロー

解析例

DNAscope™は明視野顕微鏡で観察可能な発色シグナル(赤/青)として対象の染色を行います。組織の形態を保ちつつシングルセルレベルでの染色が可能で、コピー数異常(増幅/欠失)、遺伝子再構成によって生じた融合遺伝子の可視化を可能とします。

コピー数異常(Copy Number Variation)検出

ERBB2遺伝子増幅

ERBB2遺伝子の増幅により赤のドット数が増加

CDKN2A遺伝子欠失

CDKN2A遺伝子欠失により青のシグナルのみ検出

遺伝子再構成

ALK 融合遺伝子が生じた場合シグナルは離れて観察される

プロトコル

キット＼使用サンプル	FFPE^＊1
DNAscope™ HD Duplex Reagent Kit	PDF

^*1：プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)

ターゲットプローブ

DNAscope™アッセイキットを用いて多重染色を行う場合、異なるチャネルのプローブが必要となります。

品名	品番	包装	希望販売価格
DNAscope™ Probe	XXXXXXX	1 vial (20 slides 分 )	¥203,000

ターゲットプローブのカスタム作製
既存ブローブが無い場合、カスタム作製を承ります。カスタム作製では、プローブとは別に、セットアップ料金が必要になります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Setup fee for New RNAscope/BaseScope/miRNAscope Probe	ADC	320269	1 SERV.	￥85,000

検出試薬キット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
DNAscope^TM HD Duplex Reagent Kit	ADC	324700	1 KIT	￥334,000

コントロールプローブ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
DNAscope^TM Probe - DS-Hs-CEP3q-C2	ADC	1080211-C2	1 VIAL [for 20 slides]	￥19,000
DNAscope^TM Probe - DS-Hs-CEP7q-C2	ADC	1080221-C2	1 VIAL [for 20 slides]	￥19,000
DNAscope^TM Probe - DS-Hs-CEP9p-C2	ADC	1080231-C2	1 VIAL [for 20 slides]	￥19,000
DNAscope^TM Probe - DS-Hs-CEP12p-C2	ADC	1080241-C2	1 VIAL [for 20 slides]	￥19,000
DNAscope^TM Probe - DS-Hs-CEP17q-C2	ADC	1080251-C2	1 VIAL [for 20 slides]	￥19,000