本キットで使用のシングルプライマー法*によるRACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)は、ds cDNAを鋳型に用いてターゲットcDNAをただ1種類の遺伝子特異的プライマーによるPCRで増幅します。(下図を参照)
そのメカニズムは、伸長反応時(68℃)における遺伝子特異的プライマーを含む2本鎖DNA末端領域の部分変性と、線状DNA分子の環状化傾向に基づいています。
鋳型DNA鎖の5’末端まで合成を終えた熱安定性DNAポリメラーゼが、その触媒部位へ侵入した娘鎖の5’末端領域に乗り換え(template-switching)を起こして遺伝子特異的プライマーに相補的な塩基配列を3’末端に持つ娘鎖DNAを合成します。
これが鋳型になって1種類の遺伝子特異的プライマーのみでターゲットcDNAが効率的に増幅されます。
*特許第4304350号
U.S. patent #7504240