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マイクロプレートリーダーでの検出に最適！エンドポイントカルシウムアッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

本キットは、カイネティック測定モードを使用せず、細胞内のカルシウム動態を蛍光測定で検出するホモジニアスなアッセイです。組込型液体分注器ではない従来の蛍光マイクロプレートリーダーで、底面読み取りモードを使用して測定することができます。目的の細胞に Fluo-8E™ AM色素を導入後、外付け液体分注器または手動のピペッティング操作によりカルシウムアゴニストを単に添加するだけの簡単操作です。

使用目的

本キットで使用しているFluo-8E™ の蛍光シグナルは長時間安定なため、従来の蛍光マイクロプレートリーダーを使った細胞内カルシウム測定の理想的な指示薬です。

特長

洗浄操作やプロベネシドは不要！
シンプル操作
蛍光マイクロプレートリーダーにて検出可能 (Ex/Em = 490 nm/525 nm)

構成内容

Component A: Fluo-8E™ AM
Component B: 10X Pluronic® F127 Plus
Component C: HHBS (Hanks’ with 20 mM Hepes)

アッセイ概要　(1/2 plate 分)

成長培地に細胞を調整 (100 µL/well/96 well plate もしくは 25 µL/well/384 well plate)
Fluo-8TM AM 色素導入溶液を添加 (100 µL/well/96 well plate もしくは 25 µL/well/384 well plate)
37 ℃で 60 分間インキュベート
カルシウム流動刺激剤を添加
蛍光強度を測定 (Ex/Em = 490/525 nm)

製品データ

図.1 Cell Meter™ No Wash and Probenecid-Free Endpoint Calcium Assay Kit による、ATP刺激した CHO-K1細胞の細胞内カルシウム応答
CHO-K1細胞の ATP投与量に応じた細胞内カルシウム応答を Cell Meter™ No Wash and Probenecid-Free Endpoint Calcium Assay Kit (品番36312) を使って測定した。細胞に Fluo-8E™ AM色素導入溶液を添加し、37℃で1時間培養した。ATPを添加後すぐに CLARIOstar® の底面読み取りエンドポイントモードで蛍光強度を測定した。