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ハイブリドーマの作製、選別、クローニングに有用 DiSH™ Kit

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

DiSH™ Kitは、ハイブリドーマの作製及び、蛍光もしくは磁気による選別が可能なキットです。新技術によりハイブリドーマ作製の時間とコストを節減します。

背景

Abeome社のDiSH™（Direct Selection of Hybridomas）技術は、高アフィニティの抗体を産生するハイブリドーマを選択するために、改良を重ねたものです。

遺伝子工学技術によりミエローマ融合パートナーに改良を加えることで、マーカーを発現させている目的ハイブリドーマだけを標識することを可能にしました。ハイブリドーマは一度標識されれば、数時間で何十万もの細胞の中から、FACSや磁気分離により単離することができます。

また、本キットで作製するハイブリドーマは、抗原特異的な抗体を分泌するだけでなくハイブリドーマ表面にも抗体を発現します。どちらの方法でも、リンパ球の採取からはじめのスクリーニングまで、平均で16日（14～18日）で完了します。

図1　DiSHキットフローチャート

(1) 目的抗原で免疫したマウスからリンパ球を採取します。
(2) B細胞をミエローマ細胞Sp2ab（Igα及びIgβを発現）と融合させ、特異的なイムノグロブリンを分泌・表面発現するハイブリドーマを作製します。

＜磁気ビーズによる分離方法＞
(3) 磁気標識を用いて抗原特異的ハイブリドーマを単離します。
(4) 上清をAbeoCloneのメディウムで10～14日間培養します。
(5) 10 日後、上清を分析して分泌された抗体（目に見えるコロニー）を確認します。

＜FACSによる分離方法＞
(3) 抗原特異的ハイブリドーマを、蛍光活性化セルソーター（FACS）によって、単一細胞に選別します。
(4) 96ウェルプレートに細胞を移し、10日後抗原特異的抗体の有無を分析します。
(5) 必要に応じ、目的のハイブリドーマを増幅します。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
DiSH KitA Hybridoma Selection and Cloning Kit	ENZ	ENZ-71001-0001	1 KIT [For fusion of 1x10^8 total lymphocytes]	販売終了

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Sp2ab myeloma fusion partner	ENZ	ENZ-70008-0001	1 VIAL	販売終了
Polyethylene glycol	ENZ	ENZ-70007-0001	1.5 ML	販売終了
ECM (Expansion Medium)	ENZ	ENZ-70006-0200	200 ML	販売終了
RCM (Recovery Medium)	ENZ	ENZ-70005-0200	200 ML	販売終了
AbeoClone^TM (HAT Semi-solid Medium)	ENZ	ENZ-70004-0090	90 ML	販売終了
FCM (Fusion Medium)	ENZ	ENZ-70003-0200	200 ML	販売終了
WCM (Wash Medium)	ENZ	ENZ-70002-0200	200 ML	販売終了
PCM (Prefusion Medium)	ENZ	ENZ-70001-0200	200 ML	販売終了