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96ウェルプレートで細胞内のCa 動態を蛍光検出 FluoForte® カルシウム測定アッセイ

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メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

FluoForte® カルシウム測定アッセイは、細胞内のカルシウム動態を検出・測定するホモジニアスな蛍光ベースアッセイです。FluoForte® 色素は強い発光シグナルを生じます。

特長

洗浄ステップ不要
消光剤添加不要
接着細胞にも浮遊細胞にも使用可能
ハイスループット対応

構成内容

FluoFrote® dye（凍結乾燥）
Dye efflux inhibitor（色素の流出を防ぐ試薬）
Hank's buffer, 20mM HEPES（品番51016には含まれません）

原理

FluoForte カルシウム測定アッセイの原理

FluoForte® 試薬は膜透過性のアセトキシメチル（AM）エステルとして細胞に入る。細胞内に入ると、細胞内エステラーゼにより色素が加水分解される。膜不透過性で負電荷型になった色素はカルシウムイオンに結合でき、GPCR 活性時に細胞内から放出される。いくつかの細胞は色素を細胞外に輸送するOrganic Anion Transporter を発現し、蛍光シグナルを減少させるので、キット構成品のインヒビターを加えて防ぐ。

製品データ

FluoForte は、他社A、他社Bより強い蛍光シグナルを発した
図1　FluoForte® は、他社A、他社Bより強い蛍光シグナルを発した。
Hela細胞は96ウェルマイクロプレートの1ウェルあたり、100μl、40,000細胞をまいて一晩培養した。成長培地は取り除き、HHBSで37℃、5％ CO₂条件下で1時間、100μlの4μM 他社A、他社B、FluoForte® とインキュベートした。細胞は200μlのHHBSで2回洗浄し、ATP（20μl/well）を色素流出阻害剤と一緒に100nM濃度になるように添加して、すぐにFITCチャンネルを用いて蛍光顕微鏡（Zeiss）でスキャンした。

FluoForte 試薬を室温または37℃条件下で細胞にロードした。
図2 FluoForte® 試薬を室温または37℃条件下で細胞にロードした。

参考文献

C. Perez-Terzic, et al., Cell Calcium . 21, 275（1997）
A. Tretyn, et al., Folia Histochem. Cytobiol. 35, 41（1997）
K. Kiselyov, et al., Cell Signal. 15, 243（2003）
V.V. Martin, et al., Cell Calcium. 36, 509（2004）
W. Zheng, et al., Assay Drug Dev. Technol. 2, 543（2004）

FluoForte® カルシウム測定アッセイ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
FLUOFORTE^(R) Calcium assay kit	ENZ	ENZ-51017	1 KIT [10 x 96 tests]	￥96,000
FLUOFORTE^(R) Calcium assay kit	ENZ	ENZ-51016	1 KIT [100 x 96 tests]	お問い合わせ

96ウェルプレート10枚分の試薬が含まれます（品番51017）。プレートは含まれません。

関連商品

＜使用目的＞
GFPなどの緑色蛍光を発現する細胞サンプル用に赤色蛍光色素の商品もご用意しました。洗浄不要のカルシウムインジケーター（赤色）です。

＜構成内容＞

GFP-Certified® FluoFrote® dye（凍結乾燥）
Dye effective inhibitor （色素の流出を防ぐための試薬）
Hank's buffer, 20mM HEPES（品番ENZ-51020-KP010のみ）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
GFP CERTIFIED^(R) FLUOFORTE^(R) Calcium assay kit	ENZ	ENZ-51020-KP010	1 KIT [10 x 96-well plates]	￥129,000
GFP CERTIFIED^(R) FLUOFORTE^(R) Calcium assay kit	ENZ	ENZ-51020-KP100	1 KIT [100 x 96-well plates]	お問い合わせ