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研究用

ERストレスの検出に小胞体ストレス検出試薬(ERAI ER Stress Detector)

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小胞体ストレス因子である XBP1 タンパク質の発現制御システムを利用した、小胞体ストレス(ER Stress)検出試薬です。
プラスミドDNAを細胞にトランスフェクションしてご使用ください。

背景

小胞体ストレスとは

細胞レベルのストレスには、低酸素ストレスなどの組織内要因で生じるストレスと、小胞体ストレスや酸化ストレスなど細胞内のストレスがあり、様々な疾患に関与することが報告されています。細胞ストレスのうち、タンパク質の製造・品質管理工場である小胞体で、不具合により生じた変性タンパク質(不良品タンパク質)が蓄積することで引き起こされるストレスが、小胞体ストレスです。過度の小胞体ストレスは細胞死を誘導し、これがアルツハイマーなどの神経変性疾患、メタボリックシンドローム、がんなどの要因になると考えられています。

ER Stress Detector(小胞体ストレス検出試薬)について

ERAI ER Stress Detector には、小胞体ストレス因子であるXBP1タンパク質の発現制御システムが利用されています。XBP1 mRNAはイントロンを含む分子として、いったん合成され、小胞体ストレスがない時には、不活性型 XBP1として不完全長のタンパク質が翻訳されます。一方、小胞体ストレス条件下では、イントロンが取り除かれ、完全長の活性型 XBP1 が翻訳されます。ERAI ER Stress Detector は、XBP1 cDNA のイントロン配列直下に、ルシフェラーゼを連結したレポーター遺伝子です。この ERAI ER Stress Detector を導入した細胞では、小胞体ストレスが入ることによりイントロン配列が除去され、XBP1 のN末領域とルシフェラーゼの融合タンパク質が翻訳されます。

使用例

ERAI ER Stress Detector を培養細胞に導入し、ツニカマイシン処理による ERストレスを付加します。

  1. トランスフェクション前日に、細胞を 35mm 培養プレートに播種する(接着細胞の場合、 1-3x105 細胞程度が目安)。一晩の培養で、50~80%コンフルエントになるように調節する。
  2. トランスフェクションにより、1.で用意した培養細胞に、ERAI ER Stress Detector を導入する。トランスフェクション法は、リン酸カルシウム共沈殿法や一般的に販売されているトランスフェクション試薬を用いた方法で行うことができる。詳細は、これらの方法とトランスフェクション試薬のマニュアルに準じる。
  3. 約24〜48 時間の培養後、ルシフェラーゼアッセイのために細胞を回収する6時間前に、5μg/ml ツニカマイシンを含む新しい培地と交換する。ERストレス誘導に必要なツニカマイシンの濃度は、細胞種により異なるので、注意が必要。
  4. プロメガ社のアッセイキットを用いてルシフェラーゼ活性を測定する。細胞の回収とライセートの作製方法は、キットのマニュアルに従う。
参考文献

1. Iwawaki T, Akai R, Yamanaka S, Kohno K. Function of IRE1 alpha in the placenta is essential for placental development and embryonic viability. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 16657-16662 (2009).


2. Iwawaki T, Akai R. Analysis of the XBP1 splicing mechanism using endoplasmic reticulum stress-indicators. Biochem. Biophys. Res. Commun. 350, 709-715 (2006).

小胞体ストレス検出試薬

■IRE1αの活性化によりレポーターが発現し、小胞体ストレスを高感度に検出します。

pERAI-Luc

ERAI ER Stress Detector (pERAI-Luc)

 

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ERAI 小胞体ストレス検出試薬
ERAI ER Stress Detector詳細データ
KAL STDTC-1 5 UG
¥125,000

小胞体ストレス検出試薬 HD

■より安定なIRE1αの活性化によりルシフェラーゼタンパク質が発現します。
pERAI-Lucよりも高いS/N比を実現しました。

pERAI-Luc HD

ERAI ER Stress Detector HD (pERAI-Luc HD)

 

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ERAI 小胞体ストレス検出試薬 HD
ERAI ER Stress Detector HD詳細データ
KAL STDTC-2 5 UG
¥125,000

※小胞体ストレス検出試薬と小胞体ストレス検出試薬 HDの違いについては、参考論文の2.に示されています。

【関連商品】 酸化ストレス検出試薬

■Nrf2のタンパク質発現のメカニズムを利用した酸化ストレス検出システム。

pERAI-Luc HD

OKD Oxidative Stress Detector (pOKD-Luc)

 

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OKD 酸化ストレス検出試薬
OKD Oxidative Stress Detector詳細データ
KAL STDTC-3 5 UG
¥125,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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