記事ID ： 45633

生体試料からエクソソームを分離する最も適切な方法エクソソーム分離カラム (SEC)

メーカー名：IMMUNOSTEP, S.L.

サイズ排除クロマトグラフィー (SEC) は、タンパク質やリポタンパク質などの混入物質をほぼ完全に除去し、良好な回収率で複雑な生体試料から EVs を 1 つのステップで分離する最も効率的な方法と言われています。Immunostep 社では、血漿、血清、尿、脳脊髄液などの体液から EVs を分離するための 70nm および 35nm SEC カラムを開発しました。

特長

簡便かつ迅速（15分間）
回収率が高い
高い精製率
タンパク質複合体形成のリスクを軽減
カラムラックとしても利用可能な便利なパッケージ

プロトコール

※ご注意　本動画の字幕（日本語）は、ご参照用となります。正確な内容につきましては、音声（英語）をご確認ください。

パフォーマンスデータ

図1. (A) カラムからの各画分に含まれる EVs とタンパク質の量。タンパク質 (BCA) と小胞 (FACS CD63+/CD9+) の含有量の比較。
(B) 溶出画分のフローサイトメトリー分析。Stain Index = (MFI Positive-MFI background 2σ background)
(C) SEC 画分を SD-PAGE にロードし、非還元条件下で抗 CD9 (VJ1/20) を用いてテトラスパニンCD9のウエスタンブロットを行った。

図2. SECカラムで血漿から回収したEVsのNanoSight分析。SEC によって分離された EVsは、高い純度を示す。
(A) SEC7012カラム (70-1000 nm) のデータ。
(B) SEC3512カラム (35-350 nm) のデータ。

図3. 競合カラムとの比較。回収率の点で Immunostep社のカラムの方が優れたパフォーマンスを示した。
(A) 様々な種類のカラムで分離した粒子の直径を比較したデータ。
(B) 血漿 (500 μl) を精製して得られた濃度 (粒子/ml)。

図4. 定量 RT-PCR によるエクソソーム miRNA レベルの分析。QIAGEN ハンドブックの指示に従い miRNA を抽出し、RT-PCR を実行して cDNA を取得。その後 qPCR または定量的 PCR を実行した。カラムのプロトコールは RNA の抽出や RT-PCR を妨げず、サンプル中に存在する内因性 miRNA miR-126-3p、miR-19a-3p、および miR16-5p の検出を可能にした。

エクソソーム分離カラム (SEC)

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Evs SEC 35 nm - 4 Pack	ISP	SEC3512-4	4 COLUMN	￥88,000
Evs SEC 35 nm - 8 Pack	ISP	SEC3512-8	8 COLUMN	￥162,000
Evs SEC 70 nm - 4 Pack	ISP	SEC7012-4	4 COLUMN	￥88,000
Evs SEC 70 nm - 8 Pack	ISP	SEC7012-8	8 COLUMN	￥162,000

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ExoStep Cell Culture, Human, Phycoerythrin	ISP	EXOS-25-C9	25 TEST	￥151,000
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