商品情報

記事ID : 33529
研究用

精製したエクソソームのimmunophenotypingに ExoStep™ エクソソーム フローサイトメトリー解析キット

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本商品は、ビーズ標識抗CD63捕捉抗体および蛍光色素標識抗CD9検出抗体・抗CD81抗体を使用して、フローサイトメトリーでエクソソームを検出/定量できる簡単な免疫ビーズアッセイです。再現性のある結果を提供し、エクソソームのimmunophenotypingと並行して実施することができます。

背景

エクソソームは、エンドサイトーシスにより多胞性エンドソーム1が形成され、細胞から放出されることで形成される細胞外小胞です。エクソソームは、タンパク質・脂質・mRNA・miRNA・DNAを細胞間で運搬することで細胞間の伝達を担い2,3、これにより、いくつかの疾患やがん転移に関連していると考えられています。また、がん微小環境4と免疫応答5,6を制御する可能性も示唆されています。

特長

  • 特異性が高い正確なエクソソーム検出
  • 定量分析、蛍光とエクソソーム量の優れた相関性
  • 細胞培養上清からのエクソソームを直接検出*
  • 少量のサンプルから検出可能
  • 高感度、広いダイナミックレンジ
  • 補足したエクソソーム集団を同時にimmunophenotyping

 

* 各検体から直接エクソソームを定量するプロトコールは以下をご参照ください。

構成内容

  • 抗CD63抗体結合 超常磁性捕捉ビーズ
  • ビオチン標識 抗CD9抗体 or ビオチン標識 抗CD81抗体
  • フィコエリスリン (PE) 標識ストレプトアビジン
  • 凍結乾燥エクソソーム(転移性癌細胞株由来のPC-3ヒト前立腺癌細胞より)
  • 10× アッセイバッファー

エクソソームの検出手順

エクソソームワークフローの単離/検出のためのImmunobeadアッセイ
図1. 免疫ビーズアッセイによるエクソソームのimmunophenotyping手順
超遠心法などで精製・濃縮したエクソソーム* をCD63補足ビーズと混合し、室温でオーバーナイト、インキュベートする。ここへ一次検出抗体(CD9ビオチン/CD81ビオチン)を結合し、アッセイバッファーで洗浄したあと、二次検出試薬としてPE標識ストレプトアビジンを加え、インキュベーションおよび洗浄後フローサイトメトリーにより解析。

* 細胞上清サンプルの場合は、精製ステップなしで直接検出も可能。

製品データ

ExoStepを使用したエクソソームのフローサイトメトリー解析
図2. ExoStepに結合したエクソソームのフローサイトメトリー解析
PC3細胞培養上清より精製・濃縮したエクソソームをPBSに再懸濁し、CD63補足ビーズと混合して一晩室温でインキュベートした。翌日、ビーズ結合エクソソームを一次検出抗体(CD9ビオチン/ CD81ビオチン)およびストレプトアビジン-PEで間接的に染色し、フローサイトメトリー解析を行った。

ExoStepダイナミックレンジ
図3. ExoStepダイナミックレンジ
ExoStepのダイナミックレンジ(0-128 µg)を示すフローサイトメトリーヒストグラム
サンプル:PC3細胞株由来エクソソーム

競合他社間の感度比較
図4. 競合他社間の感度比較

参考文献
  1. Yáñez-Mó M, Siljander P, Andreu Z, Bedina Zavec A, Borràs F, Buzas E et al. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. Journal of Extracellular Vesicles. 2015;4(1):27066.
  2. Pitt JM, André F, Amigorena S, Soria JC, Eggermont A, Kroemer G, Zitvogel L. Dendritic cell-derived exosomes for cancer therapy. J Clin Invest. 2016.
  3. Tkach M, Théry C. Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go. 2016 Cell 10;164(6):1226-32.
  4. Becker A, Thakur BK, Weiss JM1, Kim HS, Peinado H, Lyden D Extracellular Vesicles in Cancer: Cell-to-Cell Mediators of Metastasis. Cancer Cell 2016 Dec 12;30(6):836-848.
  5. López-Cobo S, Campos-Silva C, Valés-Gómez M. Glycosyl-Phosphatidyl-Inositol (GPI)-Anchors and Metalloproteases: Their Roles in the Regulation of Exosome Composition and NKG2D-Mediated Immune Recognition. Front Cell Dev Biol. 2016 Sep 12;4:97.
  6. Jonathan M. Pitt, Guido Kroemer, Laurence Zitvogel Extracellular vesicles: masters of intercellular communication and potential clinical interventions. 2016 J Clin Invest. 2016;126(4):1139-1143
  7. Théry C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids. Current Protocols in Cell Biology. 2006

ExoStep™ Cell culture

ヒト培養細胞から精製・濃縮したエクソソームをフローサイトメトリーでimmunophenotypingするキットです。

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販売終了

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ExoStep Urine, Human詳細データ ISP EXOS-25-U9 25 TEST
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¥202,000

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Anti CD9, Human (Mouse) CFTM Blue, VJ1/20詳細データ ISP 9CFEXO-25 25 TEST
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Anti CD9, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, VJ1/20詳細データ ISP 9FEXO-25 25 TEST
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Anti CD326, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, VU-1D9詳細データ ISP 326FEXO-25 25 TEST
¥54,000
Anti CD326, Human (Mouse) Phycoerythrin, VU-1D9詳細データ ISP 326PEEXO-25 25 TEST
¥62,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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