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MPO阻害剤などのハイスループットスクリーニングにも使用可能 Amplite™ ミエロペルオキシダーゼ蛍光測定キット

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

本商品は、溶液中や細胞ライセート中のミエロペルオキシダーゼ（Myeloperoxidase、MPO）を蛍光または吸光度で検出するキットです。

背景

ミエロペルオキシダーゼ（MPO）は好中球や単球中にもっとも豊富に存在し、ペルオキシダーゼ活性を有する緑色の血液タンパク質です。MPOは過酸化水素とハロゲンイオンとの反応を触媒し、細胞傷害性の酸およびその中間体を形成します。それにより腫瘍細胞や微生物の酸素依存性殺菌における重要な役割を担います。MPO欠損症は酵素の遺伝的欠損であり、免疫不全に罹る要因になります。

使用目的

本商品は、溶液中や細胞ライセート中のMPOを迅速かつ高感度に測定します。96ウェルや384ウェルプレートのフォーマットで使用でき、また分離ステップを介せずオートメーションアッセイでのハイスループットスクリーニングにも適応可能です。キットにはAmplite™ Red 基質が使用されており、シグナルは蛍光（Ex/Em = 540/590 nm）または吸光度（576 nm）の両方で測定が可能です（dual recordable mode）。
蛍光検出の場合の感度は、0.1 mU/mL （ミエロペルオキシダーゼ/100 µL 反応液）です。

構成内容

Component A: Amplite™ Red (光感受性)
Component B: アッセイバッファー
Component C: H₂O₂
Component D: MPO（ミエロペルオキシダーゼ）スタンダード
Component E: DMSO

プロトコール

ストック溶液の調製

Red ストック溶液 (250×)：40 µLのDMSO（Component E）をAmplite™ Red基質（Component A）のバイアルに加えます。
10 mM H₂O₂ストック溶液（500×）：10 µLの3% H₂O₂（0.88M、Component C）を870 µLのアッセイバッファー（Component B）に加えます。
200 mU/mL MPOストック溶液：50 µLのアッセイバッファーをMPOスタンダード（Component D）に加えます。

アッセイミクスチャーの調製

下記の表1に従い、遮光下でアッセイミクスチャーを調製します。

MPOスタンダードの調製（0-10 mU/mL）