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記事ID : 16658
研究用

洗浄不要!TR-FRET法によりサイクリックAMP濃度を測定Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMPアッセイキット

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本製品はTR-FRETを利用し、特異的かつ高感度にcAMPの活性をモニタリングできるキットです。

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背景

環状3’,5’ アデノシン一リン酸(Adenosine 3’, 5’ cyclic monophosphate、cAMP)は細胞内シグナル伝達における重要なセカンドメッセンジャーです。cAMPレベルのモニタリングは、GPCRのアゴニストやアンタゴニストをスクリーニングする一般的な手法の一つです。

本製品は、Gタンパク質共役受容体システムにおけるアデニル酸シクラーゼの活性をモニタリングするための便利なアッセイ法を提供します。他のcAMP ELISA アッセイキットと比較して、このホモジニアスなcAMPアッセイキットでは洗浄またはアセチル化の工程が不要です。
本アッセイでは、Anti-cAMP抗体はtrFluor™ Euで標識されており、一方のcAMPトレーサーはtrFluor™ 650で標識されています。cAMPが存在しない場合、cAMP-trFluor™ 650コンジュゲートはtrFluor™ Eu-labeled anti-cAMP抗体に独占的に結合し、622nmで強いTR-FRET放出を示します。しかし、テストサンプル中に存在するフリーcAMPがtrFluor™ Eu-labeled anti-cAMP抗体コンジュゲートに競合すると、cAMP-trFluor™ 650とtrFluor™ Eu-labeled anti-cAMP抗体との結合が妨げられます。trFluor™ 650 labeled cAMPトレーサーのみの蛍光寿命はナノ秒程度ですが、一方のtrFluor™ Eu-labeled anti-cAMP抗体と蛍光cAMPトレーサーの結合体は、TR-FRETにより非常に長い蛍光寿命値を示します。TR-FRETの強度はサンプル中のcAMP濃度に比例します。

 

TR-FRETによるcAMPアッセイ原理

特長

  • TR-FRETを利用し、特異的かつ高感度にcAMP活性をモニタリング
  • 洗浄/アセチル化工程が不要のためハイスループットスクリーニングに最適
  • 便利な96ウェルプレートおよび384ウェルプレートフォーマットで使用可能

構成内容

  • コンポーネントA:Anti-cAMP抗体(trFluor™ Eu標識)
  • コンポーネントB:cAMP-trFluor™ 650(トレーサー)
  • コンポーネントC:cAMPスタンダード
  • コンポーネントD:細胞溶解バッファー
  • コンポーネントE:希釈液

使用例

cAMP投与反応をTR-FRET cAMPアッセイキットで測定
図1. cAMP投与反応をTR-FRET cAMPアッセイキットで測定
ClarioStar マイクロプレートリーダー(BMG LABTECH社)で測定した。1nM の低濃度cAMPも検出可能。

TR-FRETのシグナル減少をTR-FRET cAMPアッセイキットで検出
図2. TR-FRETのシグナル減少をTR-FRET cAMPアッセイキットで検出 
cAMPの分泌を増加させるため、フォルスコリンによってpre-activated状態のHEK細胞を使用した。

Screen Quest™ TR-FRET cAMPアッセイキット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Screen QuestTM FRET No Wash cAMP Assay Kit詳細データ ABD 36379 1 PLATE
¥104,000
Screen QuestTM FRET No Wash cAMP Assay Kit詳細データ ABD 36380 10 PLATE
¥188,000

【関連情報】

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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