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他のグリコサミノグリカンとはほとんど交差反応しない！ヒアルロン酸定量キット

ヒアルロン酸定量キットは、ヒアルロン酸（HA）と特異的に結合するヒアルロン酸結合タンパク質（HABP）を用い、競合法により試料中の HA を定量するキットです。

背景

ヒアルロン酸（HA: Hyaluronan）

ヒアルロン酸（HA）はグルクロン酸とN-アセチルグルコサミンから構成されるグリコサミノグリカンの一種で、関節液、皮膚、臍帯、硝子体などに多く含まれます。HA は細胞外マトリックス分子として存在し、組織の水分保持や細胞の増殖、移動、分化などに関与しています。

いくつかの HA 合成酵素および HA 分解酵素が知られており、これらの働きにより生体内には種々の分子量の HA が存在します。例えば、関節液中の HA の平均分子量は 400 ～ 600 万 Da、血中の分子量は 10 ～ 30 万 Da、尿中では 1 万 Da 以下であることが報告されています。

特長

競合法で測定するため、HA の分子量による影響を受けにくい
血清、血漿、培養上清中に存在する7.4 kDa 以上のHA 濃度を正確に測定可能
測定範囲は、濃度 3.13 ～ 200ng/mL のヒアルロン酸

構成内容

内容	容量	数量
96 well プレート	8 well x 12	1 枚
HA Coating Solution	11 mL	1 本
Wash Buffer (20X）	50 mL	1 本
Sample Buffer (2X）*	50 mL	1 本
Blocking Buffer (2X）*	11 mL	1 本
HA Standard（10 µg/mL）*	0.1 mL	1 本
Biotin-HABP *	10 ～ 40 µL	1 本
HRP-Avidin (100X）*	0.2 mL	1 本
Substrate Solution A	1 mL	1 本
Substrate Solution B	10 mL	1 本
Stop Solution	11 mL	1 本
プレートシール	5 mL	2 枚

* 防腐剤として 0.025 ～ 0.05％ Proclin 300 含有

ご準備いただくもの（その他必要なもの）

※本製品の測定は吸光プレートリーダーでの測定を想定して設計しております。

吸光プレートリーダー（測定波長 450 nm）
マイクロプレートシェーカー
連続分注器
ピペットおよびチップ
ペーパータオル
容器類（チューブ、ボトル等）
メスシリンダー（500 mL または 1000 mL）
精製水

測定原理

図1　ヒアルロン酸（HA）測定原理
ヒアルロン酸固層化プレートに、ヒアルロン酸を含む試料およびビオチン標識ヒアルロン酸結合タンパク（Biotin-HABP）を添加し、固層化ヒアルロン酸に結合した Biotin-HABP を HRP-Avidin および発色基質により検出する競合法。

製品データ

測定範囲

濃度 3.13 ～ 200 ng/mL の HA を測定できます。

図2　HA 測定の検量線

血清、血漿中の HA 測定

正常ヒト血清、正常ヒト血漿、ウサギ血清、ラット血清中の HA の測定例を表 1 に示します。

**表1　血清、血漿中の HA 濃度**
測定試料	検体数	平均濃度（ng/mL）
ヒト血漿	30	18.1
ヒト血清	3	29.2
ウサギ血清	8	37.1
ラット血清	2	213.3

特異性

図3　ヒアルロン酸以外のGAGに対する交差反応性
HA 以外の GAG への交差反応性について検討した結果、本測定キットは、コンドロイチン硫酸 A（CS-A）、CS-C、CS-D、CS-E、ヘパラン硫酸（HS）、ヘパリン（Hep）、ケラタン硫酸（KS）、ケラタンポリ硫酸（KPS）に対し、1000 ng/mL までの濃度において交差反応しませんでしたが、CS-B（デルマタン硫酸）に対しては弱い反応性を示しました。なお、本測定キットは、7.4 ～ 2,367 kDa の HA において、分子量の影響を受けずに測定することが可能です。

サンドイッチ法との比較

サンドイッチ法では、測定するHAの分子量による影響を大きく受け、低分子量では実際の濃度よりも低く、高分子量で実際の濃度より高い測定結果となりますが、本「ヒアルロン酸定量キット」は分子量の影響を受けず、正確な定量が可能です。

図4　各種分子量の HA の反応性
※平均分子量 2.8 ～ 2,367 kDa の HA を用いて比較
測定キット：本キット（品番：HA-96KIT）

図5　各種分子量の HA の反応性(サンドイッチ法)
※平均分子量 2.8 ～ 251 kDa の HA を用いて比較
測定キット：市販品

**表2　競合法（ヒアルロン酸測定キット）**
分子量(kDa)	理論値(ng/mL)	実測値(ng/mL)	理論値に対する％
251	12.5	12.3	98
63	12.5	12	96
7.4	12.5	11.3	90

**表3　サンドイッチ法(市販品）**
分子量(kDa)	理論値(ng/mL)	実測値(ng/mL)	理論値に対する％
251	10	14.1	141
63	10	7.6	76
7.4	10	0.6	6

図6

製品使用文献

Yoshino Y et al., Distribution and function of hyaluronan binding protein involved in hyaluronan depolymerization (HYBID, KIAA1199) in the mouse central nervous system. Neuroscience. 2017 Apr 7;347:1-10.
Katoh S., Enhanced expression of hyaluronic acid in osteoarthritis-affected kneecartilage chondrocytes during three-dimensional in vitro culture in a hyaluronicacid-retaining polymer scaffold. Knee, 2021, 29:365-373. PMID: 33690017
Yoshino T., Distribution and function of hyaluronan binding protein involved in hyaluronan depolymerization (HYBID, KIAA1199) in the mouse central nervous system. Neuroscience, 2017, 347:1-10. PMID: 28189611
Uemura A., Intrathoracic retention of insoluble hyaluronic acid and its absorption process in rats. Int J Artif Organs, 2020, 43(4):283-287.
Kakizaki I., Characterization of Proteoglycan and Hyaluronan in Hot Water Extract from Salmon Cartilage. J Appl Glycosci (1999), 2017, 64(4):83-90. PMID: 34354500
Asai A., Roles of glomerular endothelial hyaluronan in the development of proteinuria. Physiol Rep, 2021, 9(17):e15019. PMID: 34472715
URUKÇU D., The investigation of diverse physiological and therapeutic impact of cellular-based products derived from human cumulus cells. Turkish Journal of Biology, Vol. 46: No. 5, Article 5. PMID: 37529007
Muranaka K., Elevation of Hyaluronan Synthase by Magnesium Supplementation Mediated through the Activation of GSK3 and CREB in Human KeratinocyteDerived HaCaT Cells. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 71. PMID: 35008494
Hamester F., Key Role of Hyaluronan Metabolism for the Development of Brain Metastases in Triple-Negative Breast Cancer. Cells 2022, 11, 3275. PMID: 36291142
Alhasan MA., Hyaluronic Acid Induction Promotes the Differentiation of Human Neural Crest-like Cells into Periodontal Ligament Stem-like Cells. Cells, 2023, 12(23):2743.
Yamaguchi M., Case report: Thrombotic microangiopathy concomitant with macrophage activation syndrome in systemic lupus erythematosus refractory to conventional treatment successfully treated with eculizumab. Front. Med. 9:1097528, 2023. PMID: 36698804
Hsu P, Exosome-like nanovesicles derived from kale juice enhance collagen production by downregulating Smad7 in human skin fibroblasts. Front Nutr., 2025, 12:1486572, PMID: 39996007
Bernardy J, Radiofrequency and targeted ultrasound enhance natural hyaluronic production: a pilot porcine study. J Ultrasound, 2025, 28(4):1001-1006. PMID: 40983783
Saga R, Stromal-derived high-molecular-weight hyaluronan mediates radioresistance in the prostate cancer microenvironment. Int J Radiat Biol 2025, 15:1-7. PMID: 41396818

参考文献

Haserodt S et al., A comparison of the sensitivity, specificity, and molecular weight accuracy of three different commercially available Hyaluronan ELISA-like assays. Glycobiology. 21(2):175-183. 2011.
Maeda H et al., A competitive enzyme-linked immunosorbent assay-like method for the measurement of urinary hyaluronan. Biosci Biotechnol Biochem, 63(5):892-895, 1999.