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他のグリコサミノグリカンとはほとんど交差反応しない！ヒアルロン酸定量キット

ヒアルロン酸定量キットは、ヒアルロン酸（HA）と特異的に結合するヒアルロン酸結合タンパク質（HABP）を用い、競合法により試料中の HA を定量するキットです。

背景

ヒアルロン酸（HA: Hyaluronan）

ヒアルロン酸（HA）はグルクロン酸とN-アセチルグルコサミンから構成されるグリコサミノグリカンの一種で、関節液、皮膚、臍帯、硝子体などに多く含まれます。HA は細胞外マトリックス分子として存在し、組織の水分保持や細胞の増殖、移動、分化などに関与しています。

いくつかの HA 合成酵素および HA 分解酵素が知られており、これらの働きにより生体内には種々の分子量の HA が存在します。例えば、関節液中の HA の平均分子量は 400 ～ 600 万 Da、血中の分子量は 10 ～ 30 万 Da、尿中では 1 万 Da 以下であることが報告されています。

特長

競合法で測定するため、HA の分子量による影響を受けにくい
血清、血漿、培養上清中に存在する7.4 kDa 以上のHA 濃度を正確に測定可能
測定範囲は、濃度 3.13 ～ 200ng/mL のヒアルロン酸

構成内容

内容	容量	数量
96 well プレート	8 well x 12	1 枚
HA Coating Solution	11 mL	1 本
Wash Buffer (20X）	50 mL	1 本
Sample Buffer (2X）*	50 mL	1 本
Blocking Buffer (2X）*	11 mL	1 本
HA Standard（10 µg/mL）*	0.1 mL	1 本
Biotin-HABP *	10 ～ 40 µL	1 本
HRP-Avidin (100X）*	0.2 mL	1 本
Substrate Solution A	1 mL	1 本
Substrate Solution B	10 mL	1 本
Stop Solution	11 mL	1 本
プレートシール	5 mL	2 枚

* 防腐剤として 0.025 ～ 0.05％ Proclin 300 含有

ご準備いただくもの（その他必要なもの）

※本製品の測定は吸光プレートリーダーでの測定を想定して設計しております。

吸光プレートリーダー（測定波長 450 nm）
マイクロプレートシェーカー
連続分注器
ピペットおよびチップ
ペーパータオル
容器類（チューブ、ボトル等）
メスシリンダー（500 mL または 1000 mL）
精製水

測定原理

図1　ヒアルロン酸（HA）測定原理
ヒアルロン酸固層化プレートに、ヒアルロン酸を含む試料およびビオチン標識ヒアルロン酸結合タンパク（Biotin-HABP）を添加し、固層化ヒアルロン酸に結合した Biotin-HABP を HRP-Avidin および発色基質により検出する競合法。

製品データ

測定範囲

濃度 3.13 ～ 200 ng/mL の HA を測定できます。

図2　HA 測定の検量線

血清、血漿中の HA 測定

正常ヒト血清、正常ヒト血漿、ウサギ血清、ラット血清中の HA の測定例を表 1 に示します。

**表1　血清、血漿中の HA 濃度**
測定試料	検体数	平均濃度（ng/mL）
ヒト血漿	30	18.1
ヒト血清	3	29.2
ウサギ血清	8	37.1
ラット血清	2	213.3

特異性

図3　ヒアルロン酸以外のGAGに対する交差反応性
HA 以外の GAG への交差反応性について検討した結果、本測定キットは、コンドロイチン硫酸 A（CS-A）、CS-C、CS-D、CS-E、ヘパラン硫酸（HS）、ヘパリン（Hep）、ケラタン硫酸（KS）、ケラタンポリ硫酸（KPS）に対し、1000 ng/mL までの濃度において交差反応しませんでしたが、CS-B（デルマタン硫酸）に対しては弱い反応性を示しました。なお、本測定キットは、7.4 ～ 2,367 kDa の HA において、分子量の影響を受けずに測定することが可能です。

図4　各種分子量の HA の反応性
※平均分子量 2.8 ～ 2,367 kDa の HA を用いて比較

参考文献

Haserodt S et al., A comparison of the sensitivity, specificity, and molecular weight accuracy of three different commercially available Hyaluronan ELISA-like assays. Glycobiology. 21(2):175-183. 2011.
Maeda H et al., A competitive enzyme-linked immunosorbent assay-like method for the measurement of urinary hyaluronan. Biosci Biotechnol Biochem, 63(5):892-895, 1999.