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創薬研究や毒性評価にヒトiPS細胞由来グルタミン酸作動性皮質ニューロン

メーカー名：Bit Bio Limited

ioGlutamatergic Neurons はヒト iPS細胞由来グルタミン酸作動性皮質ニューロンです。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセット¹ が組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでグルタミン酸作動性皮質ニューロンへ分化、成熟させます。

プロトコールあります！

Wild type ioGlutamatergic Neurons に加え、ハンチントン病モデル ioGlutamatergic Neuronsが新登場!

特長

ばらつきが少ない：ロット間のばらつきが少なく、創薬や毒性評価のモデルとして利用可能。
短時間で使用可能：最短で、細胞融解後2日目で実験に使用可能。8日目で自発電機活動を確認できる。
スケールアップ可能：基礎的な研究からスクリーニングスケールまで対応。
簡便：1種類の培地、2ステップのプロトコールで分化・成熟させることが可能。

仕様

細胞由来	ヒト iPS 細胞
ドナー性別	男性
核型	Normal (46, XY)
包装	Small: >0.75 x 10⁶ cells Large: >1.5 x 10⁶ cells
品質確認方法	・免疫染色 (MAP2 / TUBB3 / VGLUT1 / VGLUT2) ・ RT-PCR (OCT4 / TUBB3 / GRIA4 / NANOG / SYP / vGLUT2)
推奨播種密度	30,000 cells/cm²
推奨培地	Neurobasal (ThermoFisher)をベースに調製が必要
使用可能なプレート	6、24、96、384ウエルプレート

製品データ

免疫組織染色とRNA-seqにて細胞の性質を検証

ioGlutamatergic Neurons の大部分はグルタミン酸作動性ニューロンで構成されており(>80%)、神経マーカーである MAP2、TUBB3、グルタミン酸トランスポーターであるVGLUT1、VGLUT2を発現しています。残りのニューロン画分はコリン作動性ニューロンマーカーを発現しています。また、bulk RNA-seq解析にて、吻側中枢神経系の特徴を示し、皮質マーカーであるFOXG1 および TBR1を発現することを確認しています。

図1
培養開始後11日目の細胞について、神経マーカーであるMAP2、TUBB3、グルタミン酸トランスポーターであるVGLUT1、VGLUT2を抗体を用いて染色した。

他社製品と比較し低い細胞密度で研磨可能

短期間で分化・成熟させることが可能

製品はグルタミン酸作動性皮質ニューロンの前駆細胞として提供されます。細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでグルタミン酸作動性皮質ニューロンへ分化、成熟させます。

ioGlutamatergic Neuronsの同期

ioGlutamatergic Neuronsをラットアストロサイトと共培養し、64電極の微小電極アレイ (MEA) で解析した。播種後 8、13、20日目の細胞について10分間計測した際のArray Wide Spike Detection Rate (AWSDR) を示す。播種後13日目で同期が見られ、20日目では同期が上昇した。

参考文献

Pawlowski et al. Stem Cell Reports 2017

Wild type ioGlutamatergic Neurons

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ioGlutamatergic Neurons - Human iPSC-Derived Glutamatergic Neurons	BIT	IO1001S	1 VIAL [1 x 10^6 cells/vial]	￥277,000
ioGlutamatergic Neurons - Human iPSC-Derived Glutamatergic Neurons	BIT	IO1001L	1 VIAL [5 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ

ハンチントン病モデル ioGlutamatergic Neurons

ioGlutamatergic Neurons (品番：IO1001) のHTT遺伝子に、CRISPR/Cas9を用いて50CAGリピートを導入しています (ヘテロ接合型)。ハンチントン病モデルとしてご使用いただけます。

Wild type ioGlutamatergic Neurons と ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT の形態
ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WTとその親株 (Wild type ioGlutamatergic Neurons) では、形態やネットワーク形成に違いは見られなかった。

神経マーカー、グルタミン酸作動性ニューロンマーカーの遺伝子発現
細胞融解後11日目のWild type ioGlutamatergic Neurons (WT) および ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT (50CAG/WT) について、RT-qPCR解析を行った。リファレンスとして、親株であるiPS細胞のcDNAサンプルも併せて解析した。ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT (50CAG/WT)の解析結果はWild type ioGlutamatergic Neurons (WT) と同様で、多分化能マーカーの発現が見られず、神経マーカー、グルタミン酸作動性ニューロンマーカーの強い発現が見られた。

Huntingtin (HTT) 発現
細胞融解後11日目のWild type ioGlutamatergic Neurons (WT) および ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT (50CAG/WT) についてqPCR解析を行い、細胞融解後20日目の細胞 (WTおよび 50CAG/WT) について免疫染色を行った。Huntingtinを赤色、核を青色 (Hoechst) で示す。両細胞でHuntingtin 発現を確認できた。

ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT - Human iPSC-Derived Glutamatergic Neurons	BIT	IOEA1004S	1 VIAL [1 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ
ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT - Human iPSC-Derived Glutamatergic Neurons	BIT	IOEA1004L	1 VIAL [5 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ