記事ID ： 45616

HEK293細胞浮遊培養用一過性発現培地 KP293 type 2 Expression medium

メーカー名：極東製薬工業株式会社

本培地は、ヒト胎児腎細胞由来293細胞（例：Expi293F細胞，293T細胞等）の浮遊、攪拌培養用の培地です。293細胞を利用した組換えタンパク質発現等の生産にご利用いただけます。

特長

国内の自社工場で製造(Made in Japan）
リポフェクション法やポリエチレンイミン法を使ったトランスフェクションが可能
化学的組成が明らかな無血清培地
動物由来成分・タンパク質不含

本品で発現させたタンパク質例

GFP（Green Fluorescent Protein）
分泌型アルカリフォスファターゼ
PLXDC2細胞外タンパク質（分泌、ヒト型、マウス型）
SARS-CoV2タンパク質3種類（NP, ORF 3b, ORF8）
ウサギモノクローナル抗体（分泌）

商品データ

評価した細胞(Expi293F細胞)は、本培地にアダプテーションして使用しました。

細胞増殖

【培養条件】
播種密度　：0.4x10⁵ cells/mL
培養容器　：125 mL flask
培地量　　：20mL
培養方法　：振とう培養（回転数 135 rpm）
培養環境　：37°C,5% CO₂

図1.
表記の条件で、本培地（KP293 type 2) および比較用培地（Medium A)で培養した。培養 3 日目には 3x10⁶ cells/mL 以上の細胞増殖が認められ、10 継代安定して培養できた。

トランスフェクション効率(GFP発現細胞率)

図2.
Polyplus® FectoPro® transfection kit を用いて、GFP Plasmid をトランスフェクションした。GFP の発現細胞数はフローサイトメーターで測定した。トランスフェクション後 24時間及び48時間の蛍光イメージ図。24時間後には76.5%、48 時間後には87.7%の GFP 発現率が認められた。

Rabbit IgG（whole molecule）発現量

【トランスフェクション条件】
試薬　　　　: FectoPro® Reagent
細胞数　　　: 2.0-2.5×10⁶cells/mL
　　　　　　　Cell viability > 95%
試藥量　　　: 1.2 uL/mL
DNA 量　　　: 0.8 ug/mL
HC:LC(比率) : 1:2
培地量　　　: 30 mL
添加剤　　　: FectoPro® Booster 0.4 ul/mL
　　　　　　　（トランスフェクション1時間後）
振とう速度　: 135 rpm
培養環境　　: 37°C, 5% CO₂

図3.
表記の条件で、トランスフェクションを行い、培養 3日目および5日目のIgG の発現量を Octet Qke システム(Protein A)で測定した。本培地を用いた場合、3日目には90 mg/L以上、5日目には 140mg / L以上のIgGの発現が認められた。

KP293 type 2 Expression medium × PEI MAX®を使用したトランスフェクション

図4.
表記の条件で、本培地（KP293 type 2) とPEI MAX®(Polysciences社品番：24765)を使用したトランスフェクションを行い、培養5日目のIgGの発現量をOctet Qke システム(Protein A)で測定した。5日目には 100mg / L以上のIgGの発現が認められた。

PEI MAX®の詳細はこちら

FAQ

【01】本品にグルタミンは含まれていますか？

本品は、L-Alanyl-L-Glutamineを含有しておりますので、別途L-Glutamineの添加の必要はありません。

【02】他の培地からの馴化（アダプテーション）は可能ですか？

可能です。方法を知りたい場合はお問い合わせください。

【03】本品で実績のある細胞株は？

Expi293F、293T細胞です。今後、実施例を増やしていく予定です。

【04】保管上の注意点はありますか？

本品は、冷蔵、遮光条件で保存してください。

参考文献

Nakagawa M. et al, Electrophoresis 2023 Sep; 44(17-18:1446-1460.
Arakawa T. et al, Methods in Cell Biology. Academic Press, 2022.
Nakagawa M.et al, Int J Biol Macromol. 2021 Oct 31;189:869-878.
Sakuma C. et al, Int J Biol Macromol. 2021 Mar 1;172:589-596.
Sakuma C. et al, Int J Biol Macromol. 2021 Jan 1;166:1106-1110.
Li C. et al, Int J Biol Macromol. 2020 May 15:151:885-890.
荒川力他，生化学93(4),566-572,2021-08

KP293 type 2 Expression medium

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
KP293 type 2 Expression medium	KYO	29335	1000 ML	￥31,000

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