記事ID ： 46359

配列非特異的にDNA・RNA両方を分解するエンドヌクレアーゼ
MaxNuclease™, GMP-Grade

メーカー名：KactusBio Inc

MaxNuclease™は、すべての DNA と RNA を 2 ～ 5 塩基のオリゴヌクレオチドに分解する GMP グレードのユニバーサルヌクレアーゼです。本製品は、GMP 製造基準に従って開発および検証されており、製造プロセス全体を通じて原材料のトレーサビリティが確保されています。また、米国 FDA ドラッグマスターファイル (#036799) に登録されており、製造プロセスと管理、材料管理などの側面に関する文書を提供しています。

技術情報（FAQ）あります！

図1. MaxNuclease™によるPCR産物、ゲノムDNA、プラスミドDNAの分解
PCR 産物、ゲノム DNA、プラスミド DNA に添加された MaxNuclease™ は、主要な競合製品と同等の核酸分解活性を示します。

背景

バイオ医薬品の分野では、AAVベクター、抗体医薬、ワクチン、組換えタンパク質医薬品など、多様な生物製剤が細胞培養を通じて生産されています。これらの製品には、精密な精製工程を経ても宿主由来の残留核酸が含まれる可能性があり、病原性や腫瘍原性のリスクを伴うため、国内外の規制当局は残留核酸の管理に厳格な基準が設けられます。そのため、製造プロセスにおける効率的な核酸除去は、製品の安全性と品質を確保する上で重要な課題となっています。また、CAR-T細胞療法でも、レンチウイルスの大規模精製、タンパク質抽出などの分野において核酸残留物の厳格な管理が求められています。

現在、核酸を除去する方法としては、主に酵素分解、ポリエチレンイミン（PEI）沈殿、イオン交換クロマトグラフィーなどがあります。これらのうち、非特異的ヌクレアーゼを使用する酵素法は、効率、費用対効果、使いやすさの点で好まれています。

KACTUS社では、すべての DNA と RNA を 2 ～ 5 塩基のオリゴヌクレオチドに分解する GMP グレードのユニバーサルヌクレアーゼ MaxNuclease™ を開発しました。本製品は、GMP 製造基準に従って開発および検証されており、製造プロセス全体を通じて原材料のトレーサビリティを確保しています。また、米国 FDA ドラッグマスターファイル (#036799) に登録されており、製造プロセスと管理、材料管理などの側面に関する文書を提供しています。

特長

高い分解能：MaxNuclease™は、二本鎖・一本鎖、線状・環状、スーパーコイル状など、あらゆる形態のDNAおよびRNAを2～5塩基長のオリゴヌクレオチドに完全に分解します。
非特異的活性：塩基配列に依存せず、広範な核酸をターゲットとするため、さまざまな製造プロセスでの核酸除去に適しています。
GMP準拠の製造：GMPガイドラインに従って製造され、FDAのドラッグマスターファイル（DMF #036799）に登録されています。
多様なアプリケーション：
　・生物製剤からのDNA/RNAの除去
　・核酸による粘度上昇の低減
　・ウイルスワクチンやウイルスベクターの精製
　・ウェスタンブロット、2次元電気泳動、ELISA、クロマトグラフィーにおけるサンプル調製
　・細胞凝集の防止
残留酵素の確認が可能：
MaxNuclease™の使用後、最終製品における残留物の管理は品質保証の重要なポイントです。KACTUS社では、MaxNuclease™ ELISA kit (後述)を提供しており、本酵素の微量残存を高感度に検出可能です。

製品仕様

FDA ドラッグマスターファイル	＃36799
由来	Serratia marcescensのエンドヌクレアーゼ遺伝子を持つE.Coli
分子量	約27.8 kDa
組成	20mM Tris-HCl, 20mM NaCl, 2mM MgCl₂, 50% Glycerol, pH 8.0
活性	≥250 U/µL, Herring Sperm DNAの分解により測定
ユニット数の定義	1Unitは、37°C、pH 8.0で 30分以内に 260 nmの吸光度が 1.0に変化するのに必要な酵素の量に相当

品質検査項目

活性	≥ 250 U/µL
純度 (Bis-Tris)	≥ 95%
純度 (SEC-HPLC)	≥ 99%
残留プロテアーゼ	陰性
残留宿主タンパク質	≤ 10ppm
エンドトキシン	≤ 0.01 EU/kU
無菌試験	陰性
残留重金属	≤ 10ppm
マイコプラズマ	陰性

使用例

MaxNuclease™

図2．宿主細胞由来DNAの除去
ウイルス採取溶液を、それぞれ 25U/mL および 50U/mL エンドヌクレアーゼで 37°C で 2 時間処理した。宿主細胞 DNA (HCD) 残留物の検出を分析した。MaxNuclease™ は競合製品 B よりも分解活性が高く、25U/mL および 50U/mL のどちらの濃度でも HCD 残留物が少ないことが示された。

図3．プラスミドDNAの除去
ウイルス採取溶液を、それぞれ 25U/mL および 50U/mL エンドヌクレアーゼで 37°C で 2 時間処理した。プラスミド DNA (pDNA) 残留物の検出を分析した。MaxNuclease™ は競合製品 B よりも分解活性が高く、25U/mL および 50U/mL のどちらの濃度でも pDNA 残留物が少ないことが示されました。

MaxNuclease™ ELISAキット

図4.
ウイルスベクターやワクチンなどの生物学的製品の場合、MaxNuclease™ で核酸を除去した後、最終製品内に残留する MaxNuclease™ を評価することも必要です。 KACTUS社は、感度が最大 23 pg/mL の高感度でMaxNuclease™ の残留が検出可能なキット、MaxNuclease™ ELISA キットを販売しております。