miRNA のcDNA を簡便に増幅 microScript microRNA cDNA 合成キット

microScript microRNA cDNA 合成キットは、トータルRNA または濃縮済microRNA（miRNA）サンプルから cDNA を逆転写するためのキットです。

本製品は、all-in-one かつ ready-to-use のキットで、2x反応ミックスと microScript microRNA 酵素ミックスがセットになっています。NORGEN社のmicroScript 逆転写酵素は、モロニーマウス白血病ウイルス（M-MuLV；Moloney Murine Leukemia Virus）の変異型で、RNase H 活性が低減され、熱安定性が増加しています。

microScript microRNA cDNA 合成キットは、2x反応ミックスと酵素ミックス、RNAテンプレートをシングルチューブで混合するだけのシンプルなワークフローが特長です。

次いで、サーマルサイクラーで反応させると、poly（A）tailは最初にRNAに付加され、続いてアダプタープライマーを用いてcDNA合成を行います。シングルチューブでの調製は、使いやすさに加えて優れた一貫性と感度を実現します。合成されたcDNAは、ユニバーサルPCRリバースプライマーとmicroRNA 配列を含むフォワードプライマーを用いて、PCRまたは qPCR に利用いただけます。シングルチューブでの cDNA 調製は、異なる microRNA を同時にいくつも PCR増幅する場合に有用です。さらに、トータルRNAからのcDNA 調製は、遺伝子特異的プライマーを用いて mRNAや長鎖RNAの PCRまたはqPCR検出にも使用することができるため、microRNA／ microRNAターゲットを並列で評価することを可能にします。

• 便利
   - ready-to-use のマスターミックスにテンプレートと酵素を加えるだけの逆転写酵素反応セットアップ
• 一回のcDNA合成で、複数のmicroRNA、microRNAターゲットを解析
   - 各microRNA cDNA合成反応後に、異なるmicroRNA および microRNAターゲットをPCR検出
• 時間の節約に
   - より少ないピペット操作で逆転写反応液調製が可能
• 経済的
   - 反応に必要なものはすべてready-to-useマスターミックスに入っているので、酵素、dNTPsおよびバッファーの個別購入は必要ありません
• 高感度・高収量
   - 最適化されたマスターミックスにより、高感度で高収量のPCR増幅を実現
• ロバストな酵素
   - microScript逆転写酵素は、難しいテンプレートの増幅や高温反応における高い再現性を実現

図1．高感度でロバストな microRNA増幅
microScript microRNA cDNA合成キットを用いて、200 ng - 2 pg の各RNA量でmicroRNAを増幅した。microScript microRNA cDNA合成キットをRT-qPCR 反応に利用し、Total RNA精製キットで分離したHeLa細胞由来のトータルRNAから ヒト miR-1246 と miR-21を増幅した。こられらのPCRターゲットは、幅広い範囲のいずれのRNAインプット量でも増幅された。

図2．トータルRNA転写産物（microRNAs および mRNA）のロバストな逆転写
microScript microRNA cDNA合成キットは、microRNA とmRNAや長鎖RNAなどを効率的に逆転写できるため、microRNAとmicroRNAターゲットを並列で解析できます。HeLa 細胞由来の RNA (200 ng) をテンプレートとしてcDNAを合成し、3つの異なるRNAのqPCR反応に使用した。上部のパネルは、miR-21（microRNA）、5S rRNA（RNA without poly-A tail）、S15（large mRNA）の増幅の成功を示す。下部のパネルは、3つのPCR増幅アンプリコンがユニークな融解曲線の特性を有することを示す。

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