記事ID ： 16032

モノアミンオキシダーゼ MAO-A および MAO-B を測定 OxiSelect™ モノアミン酸化酵素アッセイキット（比色／蛍光）

メーカー名：Cell Biolabs, Inc.

OxiSelect™ モノアミン酸化酵素アッセイキットは、生体サンプル中の MAO-A および MAO-B を測定するキットです。比色法（品番： XPX-5006）または蛍光法（品番： XPX-5000）をご利用いただけます。

背景

モノアミン酸化酵素（MAO／モノアミンオキシダーゼ）

モノアミン酸化酵素（MAO／モノアミンオキシダーゼ）は、ミトコンドリア外膜に存在し、モノアミンの酸化的脱アミノ反応を触媒する酵素群です。MAOには、MAO-A と MAO-B の2つのアイソフォームが存在し、局在や基質親和性、阻害剤の特異性などに基づいて区別されます。MAO は神経伝達物質を制御しており、MAOの機能異常は、うつ病、薬物依存、偏頭痛、統合失調症、注意欠陥障害、パーキンソン病、アルツハイマー病などに関与します。

特長

生体サンプル中の MAO-A および MAO-B を検出
キットには MAO 基質と阻害剤が付属
キットには過酸化水素スタンダードが付属
蛍光または比色検出を利用可能

構成内容

96ウェルタンパク質結合プレート（品番： XPX-5006）または 96ウェルマイクロタイタープレート（品番： XPX-5000）
200X 比色プローブ（品番： XPX-5006）または 200X 蛍光プローブ（品番： XPX-5000）
HRP
過酸化水素
100X チラミン
100X ベンジルアミン
MAO-A 阻害剤
MAO-B 阻害剤
10X アッセイバッファー

測定原理

本アッセイでは、生体サンプル中の MAO-A および MAO-B を測定します。MAO は基質と反応し、過酸化水素を生成します。過酸化水素とプローブの反応により、サンプル中の MAO 量に直接比例するシグナルを、比色法または蛍光法により検出できます。未知のサンプルの MAO 活性は、過酸化水素スタンダードカーブに基づいて計算されます。

使用例

比色キット（品番： XPX-5006）

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図1 H₂O₂ スタンダードカーブ

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図2　MAO-A の測定
アッセイプロトコールに従い、50 µg/mL モノアミン酸化酵素Aを、MAO-A 阻害剤（クロルジリン）または MAO-B 阻害剤（パルギリン）とインキュベートした。その後、基質となるチラミンまたはベンジルアミンとアッセイ溶液中で45分間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで 540 nm の吸光度を測定した。

蛍光キット（品番： XPX-5000）

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図3 H₂O₂ スタンダードカーブ

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図4　MAO-A の測定
アッセイプロトコールに従い、50 µg/mL モノアミン酸化酵素Aを、MAO-A 阻害剤（クロルジリン）または MAO-B 阻害剤（パルギリン）とインキュベートした。その後、基質となるチラミンまたはベンジルアミンと、アッセイ溶液中で45分間インキュベートし、Spectra MAX GeminiXS Fluorometer を用いて蛍光を測定した（励起 544 nm／蛍光 590 nm）。

参考文献

Hall, D.W.R., et al. Biochem. Pharmacol. (1969) 18: 1447-1454.
Tatyana, V., et al. Neurochem. (2001) 79: 266.
Tipton, K. F., et al. Biochem. J. (1968) 108: 95-99.
Youdim, M.B. (1976) Preparation of Human Platelets. In Monoamine Oxidase and It’s Inhibition North-Holland, N.Y., 405-406.
Youdim, M.B., et al. Methods Enzymol. (1987) 142: 617-627.