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記事ID : 17200
研究用

細胞・組織ライセート中のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを検出NAD+/NADH アッセイキット(比色/蛍光)

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NAD+/NADH アッセイキットは、細胞・組織ライセート中の NAD+ および NADH を検出できるキットです。
トータル(総) NAD+/NADH を検出できます。また、サンプルを、酸または塩基で処理することで、NAD+ または NADH を特異的に検出できます。

比色法(品番: MET-5014)または蛍光法(品番: MET-5030)をご利用いただけます。

背景

NAD(ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド)とは

ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)は、リン酸基によって結ばれた2つのヌクレオチド、アデニンおよびニコチンアミドからできています。全ての生細胞でみられ、解糖系やクエン酸回路などにおいて、電子伝達体として機能します。NADは、電子受容体として作用する酸化型(NAD+)と、電子供与体として作用する還元型(NADH)の2つの状態を循環します。

構成内容

比色キット(品番: MET-5014)

  • 比色プローブ
  • NAD サイクリング基質
  • アッセイバッファー
  • 抽出バッファー (10X)
  • NAD サイクリング酵素
  • NAD+ スタンダード

蛍光キット(品番: MET-5030)

  • 蛍光プローブ (40X)
  • NAD サイクリング基質
  • アッセイバッファー
  • 抽出バッファー (10X)
  • 電子伝達体 (500X)
  • NAD サイクリング酵素
  • NAD+ スタンダード

原理

本アッセイは、NAD+ を NADH に還元する酵素サイクリング反応を利用しています。
比色キット(品番: MET-5014)では、比色プローブと反応させた後、マイクロプレート分光光度計(450nm)で検出します。
蛍光キット(品番: MET-5030)では、蛍光プローブと反応させた後、蛍光プレートリーダー(励起 530-570nm/蛍光 590-600nm)で検出します。
その後、サンプル中の NAD+/NADH 量を、NAD+ スタンダードカーブに基づいて算出します。

NAD+/NADH サイクリングアッセイの原理

図1 比色法 NAD+/NADH サイクリングアッセイの原理

NAD+/NADH サイクリングアッセイの原理

図2 蛍光法 NAD+/NADH サイクリングアッセイの原理

製品データ

比色キット(品番: MET-5014)

NAD+ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性

図3  NAD+ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性
本キットを用いて、NAD+、NADH、NADP+、NADPH を試験した。

NAD+/NADH の検出

図4 NAD+/NADH の検出
プロトコールに従って抽出した NAD+ および NADH 各 1 µM を試験した。
NAD+ または NADH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

蛍光キット(品番: MET-5030)

NAD+ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性

図5  NAD+ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性
本キットを用いて、NAD+、NADH、NADP+、NADPH を試験した。

NAD+/NADH の検出

図6 NAD+/NADH の検出
プロトコールに従って抽出した NAD+ および NADH 各 100 nM を試験した。
NAD+ または NADH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

NAD+/NADH アッセイキット

比色

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
NAD+/NADH Assay Kit詳細データ CBL MET-5014 1 KIT
[100 assays]
¥92,000
蛍光
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
NAD+/NADH Assay Kit (Fluorometric)詳細データ CBL MET-5030 100 ASSAY
¥92,000

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