細胞・組織ライセート中のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを検出 NAD⁺/NADH アッセイキット（比色／蛍光）

NAD⁺/NADH アッセイキットは、細胞・組織ライセート中の NAD⁺ および NADH を検出できるキットです。トータル（総） NAD⁺/NADH を検出できます。また、サンプルを、酸または塩基で処理することで、NAD⁺ または NADH を特異的に検出できます。

比色法（品番： MET-5014）または蛍光法（品番： MET-5030）をご利用いただけます。

NAD（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）とは

ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）は、リン酸基によって結ばれた2つのヌクレオチド、アデニンおよびニコチンアミドからできています。全ての生細胞でみられ、解糖系やクエン酸回路などにおいて、電子伝達体として機能します。NADは、電子受容体として作用する酸化型（NAD⁺）と、電子供与体として作用する還元型（NADH）の2つの状態を循環します。

比色キット（品番： MET-5014）

• 比色プローブ
• NAD サイクリング基質
• アッセイバッファー
• 抽出バッファー (10X)
• NAD サイクリング酵素
• NAD⁺ スタンダード

蛍光キット（品番： MET-5030）

• 蛍光プローブ (40X)
• NAD サイクリング基質
• アッセイバッファー
• 抽出バッファー (10X)
• 電子伝達体 (500X)
• NAD サイクリング酵素
• NAD⁺ スタンダード

本アッセイは、NAD⁺ を NADH に還元する酵素サイクリング反応を利用しています。
比色キット（品番： MET-5014）では、比色プローブと反応させた後、マイクロプレート分光光度計（450nm）で検出します。
蛍光キット（品番： MET-5030）では、蛍光プローブと反応させた後、蛍光プレートリーダー（励起 530-570nm／蛍光 590-600nm）で検出します。
その後、サンプル中の NAD⁺/NADH 量を、NAD⁺ スタンダードカーブに基づいて算出します。

図1　比色法　NAD⁺/NADH サイクリングアッセイの原理

図2　蛍光法　NAD⁺/NADH サイクリングアッセイの原理

比色キット（品番： MET-5014）

図3　 NAD⁺ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性
本キットを用いて、NAD⁺、NADH、NADP⁺、NADPH を試験した。

図4　NAD⁺/NADH の検出
プロトコールに従って抽出した NAD⁺ および NADH　各 1 µM を試験した。
NAD⁺ または NADH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

蛍光キット（品番： MET-5030）

図5　 NAD⁺ スタンダードカーブと、本アッセイの NAD+ および NADH に対する特異性
本キットを用いて、NAD⁺、NADH、NADP⁺、NADPH を試験した。

図6　NAD⁺/NADH の検出
プロトコールに従って抽出した NAD⁺ および NADH　各 100 nM を試験した。
NAD⁺ または NADH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

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