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記事ID : 17201
研究用

細胞・組織ライセート中のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を検出NADP+/NADPH アッセイキット(比色/蛍光)

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NADP+/NADPH アッセイキットは、細胞・組織ライセート中の NADP+ および NADPH を検出できるキットです。 トータル(総)NADP+/NADPH を検出できます。また、サンプルを酸または塩基で処理することで、NADP+ または NADPH を特異的に検出できます。

比色法(品番: MET-5018)または蛍光法(品番: MET-5031)をご利用いただけます。

背景

NADP(ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸)とは

ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)は、レドックス代謝や細胞内シグナル伝達に関与する補酵素です。主な機能は電子伝達で、電子供与体として作用する還元型(NADPH)と、電子受容体として作用する酸化型(NADP+)の2つの状態を循環します。動物細胞においては、 NADPH は主にペントースリン酸経路(PPP)で生成されます。

構成内容

比色キット(品番: MET-5018)

  • 比色プローブ
  • NADP サイクリング基質
  • アッセイバッファー
  • 抽出バッファー (10X)
  • NADP サイクリング酵素
  • NADP+ スタンダード

蛍光キット(品番: MET-5031)

  • 蛍光プローブ (40X)
  • NADP サイクリング基質
  • アッセイバッファー
  • 抽出バッファー (10X)
  • 電子伝達体 (500X)
  • NADP サイクリング酵素
  • NADP+ スタンダード

原理

本アッセイは、NADP+ を NADPH に還元する酵素サイクリング反応を利用しています。
比色キット(品番: MET-5018)では、比色プローブと反応させた後、マイクロプレート分光光度計(450nm)で検出します。
蛍光キット(品番: MET-5031)では、蛍光プローブと反応させた後、蛍光プレートリーダー(励起 530-570nm/蛍光 590-600nm)で検出します。
その後、サンプル中の NADP+/ NADPH 量を、NADP+ スタンダードカーブに基づいて算出します。

NADP+/NADPH サイクリングアッセイの原理

図1 比色法 NADP+/NADPH サイクリングアッセイの原理

NADP+/NADPH サイクリングアッセイの原理

図2 蛍光法 NADP+/NADPH サイクリングアッセイの原理

製品データ

比色キット(品番: MET-5018)

NADP+ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP+ および NADPH に対する特異性

図3  NADP+ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP+ および NADPH に対する特異性
本キットを用いて、NADP+、NADPH、NAD+、NADH を試験した。

NADP+/NADPH の検出

図4 NADP+/NADPH の検出
プロトコールに従って抽出した NADP+ および NADPH 各 1 µM を試験した。
NADP+ または NADPH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

蛍光キット(品番: MET-5031)

NADP+ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP+ および NADPH に対する特異性

図5  NADP+ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP+ および NADPH に対する特異性
本キットを用いて、NADP+、NADPH、NAD+、NADH を試験した。

NADP+/NADPH の検出

図6 NADP+/NADPH の検出
プロトコールに従って抽出した NADP+ および NADPH 各 100 nM を試験した。
NADP+ または NADPH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

NADP+/NADPH アッセイキット

比色

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
NADP+/NADPH Assay Kit詳細データ CBL MET-5018 1 KIT
[100 assays]
¥92,000
蛍光
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
NADP+/NADPH Assay Kit (Fluorometric)詳細データ CBL MET-5031 100 ASSAY
¥92,000

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