細胞・組織ライセート中のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を検出 NADP⁺/NADPH アッセイキット（比色／蛍光）

NADP⁺/NADPH アッセイキットは、細胞・組織ライセート中の NADP⁺ および NADPH を検出できるキットです。 トータル（総）NADP⁺/NADPH を検出できます。また、サンプルを酸または塩基で処理することで、NADP⁺ または NADPH を特異的に検出できます。

比色法（品番： MET-5018）または蛍光法（品番： MET-5031）をご利用いただけます。

NADP（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）とは

ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（NADP）は、レドックス代謝や細胞内シグナル伝達に関与する補酵素です。主な機能は電子伝達で、電子供与体として作用する還元型（NADPH）と、電子受容体として作用する酸化型（NADP⁺）の2つの状態を循環します。動物細胞においては、 NADPH は主にペントースリン酸経路（PPP）で生成されます。

比色キット（品番： MET-5018）

• 比色プローブ
• NADP サイクリング基質
• アッセイバッファー
• 抽出バッファー (10X)
• NADP サイクリング酵素
• NADP+ スタンダード

蛍光キット（品番： MET-5031）

• 蛍光プローブ (40X)
• NADP サイクリング基質
• アッセイバッファー
• 抽出バッファー (10X)
• 電子伝達体 (500X)
• NADP サイクリング酵素
• NADP+ スタンダード

本アッセイは、NADP⁺ を NADPH に還元する酵素サイクリング反応を利用しています。
比色キット（品番： MET-5018）では、比色プローブと反応させた後、マイクロプレート分光光度計（450nm）で検出します。
蛍光キット（品番： MET-5031）では、蛍光プローブと反応させた後、蛍光プレートリーダー（励起 530-570nm／蛍光 590-600nm）で検出します。
その後、サンプル中の NADP⁺/ NADPH 量を、NADP⁺ スタンダードカーブに基づいて算出します。

図1　比色法　NADP⁺/NADPH サイクリングアッセイの原理

図2　蛍光法　NADP⁺/NADPH サイクリングアッセイの原理

比色キット（品番： MET-5018）

図3　 NADP⁺ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP⁺ および NADPH に対する特異性
本キットを用いて、NADP⁺、NADPH、NAD⁺、NADH を試験した。

図4　NADP⁺/NADPH の検出
プロトコールに従って抽出した NADP⁺ および NADPH　各 1 µM を試験した。
NADP⁺ または NADPH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

蛍光キット（品番： MET-5031）

図5　 NADP⁺ スタンダードカーブと、本アッセイの NADP⁺ および NADPH に対する特異性
本キットを用いて、NADP⁺、NADPH、NAD⁺、NADH を試験した。

図6　NADP⁺/NADPH の検出
プロトコールに従って抽出した NADP⁺ および NADPH　各 100 nM を試験した。
NADP⁺ または NADPH に、0.1N HCl または 0.1N NaOH を添加し、80℃で60分間インキュベートした。

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