記事ID ： 9746

哺乳類の血液サンプルから、簡単かつ迅速に分離・抽出！白血球 RNA精製キット

カテゴリから探す > 分子生物 > 核酸の抽出／精製 > RNAの抽出／精製 > 血液・血漿・血清

メーカー名：Norgen Biotek Corp.

Norgen社の白血球RNA精製キット（Leukocyte RNA Purification Kit）は、哺乳類の血液サンプルから白血球トータルRNAの単離と精製を40分で迅速に行うことができます。

グロビンmRNAのように全血に豊富に含まれているRNAの遮蔽効果を取り除いて白血球RNAの選択的な単離ができるので、発現プロファイリングの改善が期待できます。このキットは、large mRNAもmicroRNA（miRNA）やsmall silencing RNA（siRNA）のようなsmall RNAも含むすべての白血球RNAを単離することができます。

使用目的

白血球RNAを阻害物質を含まずに単離できるため、以下に示す多くの高感度アッセイにお使いいただけます。

バイオアナライザ
リアルタイムPCR法による定量
RT－PCR法
ノーザンブロット法
RNaseプロテクション法
プライマー伸長法
発現アレイ
次世代シーケンシング
RNAクローニング

特長

素早く簡単な工程：　
迅速なスピンカラム法により、10サンプルを40分以内に処理できます。
フェノール：クロロホルム抽出不要：　
このキットはフェノールやクロロホルム等、有毒な化学物質を用いずに白血球RNAを抽出できます。
様々なアッセイにお使いいただける、阻害物質を含まないRNAを単離：　
精製したRNAは、RT-PCR法、逆転写PCR法、ノーザンブロット法、RNaseの保護とプライマー伸長法、損傷を受けていないRNAの使用を必要とするマイクロアレイ等、遺伝子制御や機能解析に係るアッセイにお使いいただけます。
すべての白血球RNAを単離：
miRNAからlargemRNAまで、すべての白血球RNAを単離できます。
数分で白血球を全血清から分画：
様々な赤血球溶解を行うことにより、全血清サンプルから赤血球を迅速に取り除くことができます。

構成内容

RBC Lysis Solution
Binding Solution
Wash Solution
Elution Buffer
Micro Spin Columns
Collection Tubes
Elution Tube
Product Insert

その他

仕様	詳細
スピンカラムの結合量	50 µg RNAまで
スピンカラムの最大ローティング量	650 µL
精製RNA のサイズ	すべてのサイズのRNA(< 200 ntを含む)
最小血液インプット量	10 µL
最大血液インプット量	2 mL または　3 x 10⁶ leukocytes
10サンプルの精製にかかる時間	40 minutes
サンプルの種類	ヒト、ハムスター、マウス、ウサギ、ラットの血液サンプル
ヒト血液 (500 µL)　平均収量	1.5 µg
ハムスター血液 (100 µL)　平均収量	2.5 µg

使用方法

精製は、Norgen社独自の樹脂を基剤としたスピンカラムクロマトグラフィーにより行います。Norgan社の樹脂は、イオン濃度依存的にRNAを吸着します。

まず、赤血球は様々な赤血球溶解を行うことによりサンプルから取り除かれ、白血球は遠心分離により再生されます。白血球は溶解し、白血球RNAは樹脂に結合します。この条件下ではRNAのみが樹脂に結合し、不純物は溶出するか樹脂の上部にとどまります。

続いて、不純物を除去するため、結合しているRNAを洗浄します。最後に、100μｌの溶出バッファーで精製したRNAを溶出します。下図の手順フローチャートをご覧ください。

図1.操作方法

製品データ

図2.　血液中白血球RNAを効果的かつ確実に検出　
本キットは効果的に血液から白血球RNAを抽出できる。本キットを用いて、100μｌのハムスターの血液から総白血球RNA量を単離した。合計6回の精製を行い、単離した50μｌのRNAのうち7μｌを1.2%ホルムアルデヒドアガロースゲルで解析した。本キットは効果的かつ確実にRNAを単離するだけでなく、単離されたRNAには主要な28Sと18SrRNAが損なわれていないことから分かるように、高品質である。

図3.　本キットにより単離された高収量かつ高品質のRNA　
本キットは、他社のキットに比べてより高収量かつ高品質のRNAを単離することができる。本キットを用いてハムスターの血清200μｌから単離した総RNA量は、他社のキットを用いた場合に比べてより収率高く単離することができた。精製したRNA50μｌのうち1μｌをAgilent RNA Nano 6000チップで解析した。ゲルの図表(上図)とelectropherogram(下図)は、他社のキットを用いた場合と比べて本キットを用いた方が、より高品質のRNAを単離することができることを示している。特に、他社のキットで単離したRNAには存在したRNAの分解(赤で囲った部分)は、本キットによって単離されたRNAには見られなかった。さらに、本キットではより高収量のRNAを単離でき(青い線)、miRNAを含むsmallRNA (黒で囲った部分)も回収できたが、他社のキットで単離したRNAには見られなかった。以上の観察は、図3にあるようにRT-qPCRでさらに裏付けされた。

図4 多種類のRNAの収率　
本キットは、microRNAのようなsmallRNAからlargemRNAまで、あらゆる大きさのRNAを効率的に回収する。本キットを用いてハムスターの血液200μｌから単離した総RNA量は、図2で見られるように他社のキットを用いた場合に比べてより高収率に単離することができた。精製したRNA 200ｎｇ(両方とも溶出量50μｌ)は、beta-Actin gene(下図)と miR-21(上図)の検出にRT-qPCRの鋳型に使われた。2つの図表では、青線は本キットにで単離したRNAを示し、赤線は他社キットで単離したRNAを示す。見ての通り、より低いCt値が得られたことから(上図の青線)、本キットでは高い収量のmiRNAが得られたことが分かる。さらに、他社キット(下図)に比べ、本キットはmiRNAだけではなく、より効率的にある一定量のlargeRNAも得られたことが分かる。