記事ID ： 7268

目的遺伝子の阻害効果を定量 miRNA 機能検証用 3' -UTR レポータークローン

メーカー名：OriGene Technologies, Inc.

3'-UTR レポータークローンは、miRNA による目的遺伝子の阻害効果を定量します。

使用目的

アッセイ原理

目的遺伝子の3'-UTR 配列はホタルルシフェラーゼ遺伝子の下流にクローニングされています。
遺伝子の転写レベルはmiRNAとの相互作用によって調節されるため、ルシフェラーゼ活性を化学発光アッセイで測定することによりmiRNAを定量します。

図1　3' -UTR レポータークローンのアッセイ原理
（左）miRNA とUTR の相互作用によりルシフェラーゼ発現が減少した。
（右）miRNA とUTR の相互作用が生じないため、ルシフェラーゼ発現に影響しない。

ベクターマップ

オリジンテクノロジーズ社のpMirTarget ベクターは、Petersen C. P. ら（2006）のデザインを採用しています。ホタルルシフェラーゼと3'UTRmicroRNAターゲット配列は、SV40プロモーターで転写され、IRES（internal ribosome entering sequence）配列で翻訳されます。IRES配列はmiRNA とそのターゲットの相互作用に影響しません。しかし、IRES 配列によってルシフェラーゼの発現レベルは劇的に減少するため、わずかな活性変化の検出も可能です。

3'UTR レポータークローンベクターマップ
図2　3'UTR レポータークローンベクターマップ

特長

20,000 種類以上のヒト遺伝子をゲノムワイドにカバー
レポーター遺伝子としてルシフェラーゼをコード
トランスフェクションモニターとしてRFP 蛍光タンパク質（赤色）をコード
高感度：IRES 翻訳発現カセットを採用

構成内容

3' UTR reporter clone：10μg プラスミドDNA
Forward & reverse DNA ベクターシークエンス用プライマー（各100pmole）

使用例

図3　 3'UTR ルシフェラーゼレポータークローンにおける突然変異育種配列によるmir205効果の廃止
（グレイ：3'UTR レポーターコントロールクローン、ダークグレイ：mir205 と 3'UTR レポータークローン、黒：mir205 と変異型3'UTR レポータークローン）

商品リスト

品名	品番	包装	希望販売価格
3'-UTR clones of the specified reference transcript	SC2XXXXX	1clone	ご照会

※品番のXXXXXは、ターゲットにより異なる数字が入ります。下記の商品検索の手順より、Origene社のWeb上で
ご確認ください。

商品検索の手順

オリジンテクノロジーズ社のホームページ（https://www.origene.com/MicroRNA/3-UTR-Clone/）上の検索欄にご希望の遺伝子名を入れます。
右のプルダウンメニューを表示します。今回は3' -UTR Clone を選択してください。
右のGo ボタンを押すと検索が開始され、品番が表示されます。希望販売価格はお問い合わせください。