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記事ID : 37279
研究用

生理pH条件下でリン酸化タンパク質を高感度で検出!Phos-tag® Gel Stain

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背景

本商品は、Phos-tag®技術を用いた画期的なリン酸化物質(R =タンパク質、ペプチドなど)検出のための試薬です。

Phos-tag®は、中性条件下(生理的条件)で2価のリン酸モノエステルアニオンなどのアニオン性置換基と結合する性質を有しており、従来の酵素免疫法、放射性同位元素法に代わって、アニオン性置換基を持つ物質を捕捉、標識します。
また、今までは不安定で測定が困難だった不安定種リン酸化化合物も安定化します。捕捉された化合物は、一般的にpH 3〜4において、捕捉したアニオン性化合物を遊離します。

Phos-tag®は広島大学大学院 医歯薬学研究科 医薬品分子機能化学研究室にて開発されました。

特長

  • 室温、中性条件下で約2時間、簡便な操作で解析が可能
  • 放射性リン、化学標識、抗体の必要なし
  • CBB染色やMS分析など様々なアプリケーションに使用可能
  • Phos-tag®Aquaは、Phos-tag®Yellow、Magenta、Cyanよりも親水性

使用例

リン酸化タンパク質の検出感度の検証
図1 リン酸化タンパク質の検出感度の検証
12.5%(w/v)ポリアクリルアミドゲルでリン酸化および非リン酸化タンパク質を含むサンプルの電気泳動を行った後、本商品シリーズ( Phos-tag® )を用いて染色し(左)、続いてCBB G-250ゲルサテン(右)で染色を行った。

リン酸化タンパク質と非リン酸化タンパク質の検出
図2 リン酸化タンパク質と非リン酸化タンパク質の検出
10%(w/v)ポリアクリルアミドゲルで4つのインタクト(各1 µgのα-カゼイン、β-カゼイン、オボアルブミン、およびペプシン)およびALP処理をしたリン酸化タンパク質を含むサンプルの電気泳動を行った後、本商品シリーズ( Phos-tag® )を用いて染色し(左)、続いてCBB G-250ゲルサテン(右)で染色を行った。

ヒスチジンの自己リン酸化解析
図3 ヒスチジンの自己リン酸化解析(1)
ATP存在下での経時的なヒスチジンの自己リン酸化の解析をするために、 Phos-tag® Magentaを用いてゲルの染色を行った(左)後、CBB染色を行った(右)。

新規抗生物質(ヒスチジンキナーゼ阻害剤)のスクリーニング
図4 新規抗生物質(ヒスチジンキナーゼ阻害剤)のスクリーニング(1)
Phos-tag® Cyanを用いて染色をすることで、ヒスチジンキナーゼ阻害剤のスクリーニングを行った。

参考文献

(1)E. Kinoshita-Kikuta, H. Kusamoto, S. Ono, K. Akayama, Y. Eguchi, M. Igarashi, T. Okajima, R. Utsumi, E. Kinoshita, amd T.Koike et al. Quantitative monitoring of His and Asp phosphorylation in a bacterial signaling system by using Phos-tag Magenta/Cyan fluorescent dyes. Electrophoresis 2019

Phos-tag® Yellow

Phos-tag(R) Yellow

図5

Ex/Em=505nm/514nm

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Phos-tag Yellow詳細データ NAD NPGS-Y01 0.2 MG
¥20,000

Phos-tag® Magenta

Phos-tag(R) Magenta

図6

Ex/Em=547nm/561nm

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Phos-tag Magenta詳細データ NAD NPGS-M01 0.2 MG
¥20,000

Phos-tag® Cyan

Phos-tag(R) Cyan

図7

Ex/Em=643nm/661nm

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Phos-tag Cyan詳細データ NAD NPGS-C01 0.2 MG
¥20,000

Phos-tag® Aqua

Phos-tag(R) Aqua

図8

Ex/Em=551nm/564nm

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Phos-tag Aqua詳細データ NAD NPGS-A01 0.2 MG
¥20,000

Mixed reagents for Phos-tag® Common Solution 5x

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Mixed reagents for Phos-tag Common Solution 5x NAD NPGS-MR1 1 BOTTLE
¥5,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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