受容体型チロシンキナーゼ(Receptor Tyrosine Kinase Assay)は、癌、代謝、免疫など様々な疾患に関与しています。精製したタンパク質ドメインや合成基質を用いた生化学的手法は、得られる生物学的情報に制限があるため、細胞学的情報を含むキナーゼの役割の解明が待たれます。
DiscoverX社が開発した本システムでは、全長タンパク質を発現した細胞株を用いておりますので、細胞内環境における受容体チロシンキナーゼのリン酸化状態をモニタリングできます。

Figure.1 PathHunter® Cell based Kinase Assay原理
原理
PathHunter®Cell Based Kinase Assayでは、C末端にProlink (PK)標識されている受容体型チロシンキナーゼ単量体と、SH2ドメインを持つアダプタープロテイン-Enzyme Acceptor(EA)融合タンパク質を、細胞内に強制発現させています。リガンド結合によって受容体の二量体化が起こり(homodimerization, heterodimerization)、続いて受容体がリン酸化されると、SH2ドメインを持つアダプタープロテインがリクルートされ、受容体シグナル伝達複合体(Receptor signaling complex)が形成されます。それに伴い、空間的に隣接したPKとEAの結合が促され、活性型β-ガラクトシダーゼが再構成されます。このβ-ガラクトシダーゼ活性による加水分解された基質の化学発光シグナルのレベルを測定することにより、受容体型チロシンキナーゼに対する化合物の作用を同定します。
適用
- 一次、二次スクリーニングからのヒット化合物の探索
- 低分子阻害剤、抗受容体抗体、抗リガンド抗体の探索
- 抗体医薬品やアロステリックモジュレーターの作用機序の評価(figure.2)
- 細胞表面の相互作用の探索
Figure.2抗体医薬品やリガンド結合阻害評価データ
A series of commercially available anti-receptor antibodies(Blocking antibodies) were tested with PathHunter® U2OS cells expressing Erb1 (93-0681C3) . A dose dependent inhibition can be observed.
(A) PathHunter® U2OS cells expressing TrkA(93-0462C3) can also be used to profile anti-ligand antibodies. The data demonstrates agonist dose response and anti-ligand antibody’s inhibitory response.
(B) PathHunter® TrkA, TrkB and TrkC cells can be sued to identify, screen or profile small molecue inhibitors.
ターゲットリスト
TARGET | PRODUCT DESCRIPTION | 細胞株 | キット | アダプター プロテイン |
RECEPTOR TYROSINE KINASE ASSAYS |
AXL |
PathHunter® AXL Activity Assay |
○ |
|
P85 |
C-KIT |
PathHunter® C-KIT Functional Assay |
○ |
○ |
P85 |
C-MET |
PathHunter® C-MET Functional Assay |
○ |
|
GrB2 |
c-Ret-GFRα2 |
PathHunter® c-Ret-GFRα2 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
DDR1 |
PathHunter® DDR1 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
EphA4 |
PathHunter® EphA4 Functional Assay |
○ |
|
PLCG2 |
EphA5 |
PathHunter® EphA5 Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
EphA7 |
PathHunter® EphA7 Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
EphB1 |
PathHunter® EphB1 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
EphB2 |
PathHunter® EphB2 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
EphB3 |
PathHunter® EphB3 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
EphB4 |
PathHunter® EphB4 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
ErbB1 |
PathHunter® ErbB1 Functional Assay |
○ |
|
PLCG1 |
ErbB2-ErbB3 |
PathHunter® ErbB2-ErbB3 Functional Assay |
○ |
○ |
GrB2 |
ErbB4 |
PathHunter® ErbB4 Functional Assay |
○ |
|
SHC1 |
FGFR1 |
PathHunter® FGFR1 Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG2 |
FGFR1-β-Klotho |
PathHunter® FGFR1-β-Klotho Functional Assay |
○ |
|
PLCG2 |
FGFR2 |
PathHunter® FGFR2 Activity Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
Flt3 |
PathHunter® Flt3 Functional Assay |
○ |
○ |
P85 |
Flt4 |
PathHunter® Flt4 Functional Assay |
○ |
○ |
GrB2 |
IGF1R |
PathHunter® IGF1R Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
INSR |
PathHunter® INSR Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
INSRb |
PathHunter® INSRb Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
KDR |
PathHunter® KDR Activity Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
PDGFRa |
PathHunter® PDGFRa Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
PDGFRb |
PathHunter® PDGFRb Functional Assay |
○ |
○ |
PLCG1 |
TrkA |
PathHunter® TrkA Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
TrkA-P75 |
PathHunter® TrkA-P75Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
TrkB |
PathHunter® TrkB Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
TrkB-P75 |
PathHunter® TrkB-P75 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
TrkC |
PathHunter® TrkC Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
TrkC-P75 |
PathHunter® TrkC-P75 Functional Assay |
○ |
○ |
SHC1 |
B Available in Bulk Cell Only
細胞株及びキットは全て human となります。
*本細胞を用いたプロファイリングサービスも承っております。詳細はお問い合わせください。