迅速かつ簡便にAAV力価を決定するキット qPCR アデノ随伴ウイルス（AAV）タイター測定キット

本製品は、アデノ随伴ウイルス（AAV）のタイターを簡便かつ迅速に測定できるキットです。DNA抽出からqPCRによるタイター測定まで約2時間で完了します。

非特異的バックグラウンドは最小限のまま、特異性と感度が他社製品よりも優れています。付属のVirus Lysis Bufferによって分離したウイルスDNAは、2種類のスタンダードと共にqPCR測定され、得られたCt値からウイルスタイターを決定します。

• [関連商品] Applied Biological Materials社 格安siRNA発現クローンコレクション
• [関連商品] アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター＆ウイルス粒子

• DNA精製不要のため、迅速かつ正確な測定が可能
• ready-to-use 試薬のためばらつきを低減
• 2時間以内で迅速なqPCRアッセイ
• 定量アッセイ

• Virus Lysis Buffer
• Reagent Mix
• STD1（AAVスタンダード1）
• STD2（AAVスタンダード2）
• DNase Reaction Mix

サンプル調製

1. Iodaxinol密度勾配遠心法等を利用し、AAVを濃縮・精製します。
2. 1X PBSでサンプルを10⁹GC/mL 程度に希釈します。

DNase I 処理

1. チューブ内に以下の反応液を調製します。

   構成	容量 （反応系20µL）
   AAVサンプル	2 µL
   DNase Reaction Mix	18 µL

2. 37℃で15分間インキュベートし、遊離gDNA、プラスミドDNAおよび宿主細胞由来のパッケージされなかったウイルスDNAを消化します。95℃で10分間インキュベートし、DNase Iを失活させます。

ウイルスDNAの分離

1. Virus Lysis Buffer 20μLとDNase I処理AAVサンプル20μLを混合します。
2. 70℃で10分間インキュベートします。

qPCRセットアップ

1. 氷上でチューブに以下の反応液を調製します。STD1、STD2、サンプルは3連での測定を推奨します。調製後、混合して遠心します。
   

   構成	サンプル	STD 1&2	ネガティブ コントロール
   2X qPCR MasterMix	12.5 µL	12.5 µL	12.5 µL
   AAV サンプルライセート	2.5 µL	-	-
   STD1／STD2	-	2.5 µL	-
   Reagent Mix	10 µL	10 µL	10 µL
   ヌクレアーゼフリー水	-	-	2.5 µL

2. qPCR反応を行います。
   

   ステップ	温度	時間	サイクル
   酵素活性化	95℃	10分	1
   変性	95℃	15秒	40
   アニーリング／伸長	60℃	1分

計算

1. 以下の計算式でタイターを計算します。

   Titer of unknown sample = 5 x 10⁹/2^{3(Ctx-Ct1)/(Ct2-Ct1)}

   Ctx = Average of 3 Ct values of the unknown sample
   Ct1 = Average of 3 Ct values of STD1
   Ct2 = Average of 3 Ct values of STD2

2. 計算後のタイターに希釈係数をかけて、最終的なタイターを決定します。

※  表示価格について