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記事ID : 46237
研究用

アビジンと可逆的解離するビオチン誘導体 ReadiLeave™ Reversible Biotinシリーズ

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ReadiLeave™ Reversible (RLR) Biotinは、アビジン/ストレプトアビジンとの結合が可逆的に解離できるように設計された新しいビオチン誘導体です。

ABD_RLR_Biotin_01.png
図1. ReadiLeave™ Reversible Biotin Succinimidyl Ester(品番:3400)の構造

使用目的

ビオチンはタンパク質、核酸、ナノ粒子等に簡単にコンジュゲートでき、アビジン/ストレプトアビジンと特異的に結合するため、さまざまな用途で使用されます。ビオチンとストレプトアビジンの相互作用は強力なため、いったん形成されると、極端な pH、温度、有機溶媒、その他の変性剤でも影響を受けないほど堅牢です。

ReadiLeave™ Reversible (RLR) Biotinは、アビジン/ストレプトアビジンとの結合が可逆的に解離できるように設計された新しいビオチン誘導体です。 この製品は、従来のビオチンと補完的に使用可能で、ストレプトアビジンに対して適度な結合力を持ちます。そのため、結合はしっかりしていながらも、解離が可能です。

使用例(一例)

タンパク質へのコンジュゲート

  1. 1xPBSに溶解したタンパク質に対してReadiLeave™ Reversible Biotin Succinimidyl Esterを加える (ヤギ抗マウス IgG と RLR ビオチン SE では1:10程度のモル比。量比はご自身で最適化をお願いいたします。)
  2. 30-60分 回転混和
  3. PD-10カラムで精製
  4. 280 nmでの吸光度で濃度測定

タンパク質のプルダウンアッセイ

Step1: RLR ビオチン化タンパク質を樹脂に結合する
  1. アプリケーションに適したストレプトアビジン樹脂を選択する。
  2. 樹脂を1xPBSまたは適切な洗浄バッファーで洗浄し、平衡化する。
  3. RLRビオチン化タンパク質を加え、30分間程度インキュベートする。
  4. 未結合のタンパク質除去のため樹脂を洗浄後、PBSで平衡化する。
Step2: ターゲットタンパク質のプルダウン
  1. ターゲットタンパク質を含むサンプルをStep1で準備した樹脂に加える。
  2. 60分間程度インキュベートし、RLRビオチン化タンパク質樹脂によりプルダウンする。
Step3: ターゲットタンパク質の溶出
  1. 樹脂を遠心し、上清を除去する。
  2. 1xPBSバッファー(pH=7.2〜7.4)または適切な洗浄バッファーで樹脂を洗浄する。必要に応じて洗浄を繰り返す。
  3. 溶出バッファー(4 mM d-ビオチン、50 mM NaClを含む20 mM Tris-HClバッファー(pH=7.5))を加え、37°Cで10分以上インキュベートする。この操作を必要に応じて繰り返す。
  4. すべての溶出液を集め、ターゲットタンパク質とRLRビオチン化タンパク質の複合体を任意の方法で解析する。

注意:上記はあくまで一例となります。サンプルに応じて適宜濃度等の最適化を推奨いたします。

ReadiLeave™ Reversible Biotin

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Succinimidyl Ester new詳細データ ABD 3400 1 MG
[3400]
¥20,000
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Succinimidyl Ester new詳細データ ABD 3401 5 MG
[3401]
¥62,000
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Maleimide new詳細データ ABD 3402 1 MG
[3402]
¥41,000
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Azide new詳細データ ABD 3403 1 MG
[3403]
¥41,000
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Alkyne new詳細データ ABD 3404 1 MG
[3404]
¥41,000
ReadiLeaveTM Reversible Biotin Amine new詳細データ ABD 3405 1 MG
[3405]
¥41,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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