記事ID ： 18317

ビオチンの標識効率をそのまま測定可能！ ReadiLink™ ビオチン標識・定量キット

カテゴリから探す > 抗体アッセイ > 抗体・タンパク質標識 > ビオチン・酵素標識（ALP／HRPなど）

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

ReadiLink™ ビオチン標識・定量キットは、カラータグの付いたビオチンを用いることにより、タンパク質のアミノ基のビオチン標識および修飾されたビオチンの定量が可能なキットです。

背景

図1 ReadiView™ビオチン-スクシンイミジルエステル

ビオチンとは、抗体などの標識に広く用いられている生体分子の一つです。ビオチンとアビジン／ストレプトアビジン分子の特異的かつ極めて強力な結合を利用し、様々なEIAのアッセイ感度の増幅に利用されています（ABC法：Avidin-Biotin Complex）。

本キットは、IgGや他のタンパク質のアミノ基を標識する、AAT社開発のスクシンイミジルエステルを持つReadiView™ ビオチンを使用しています。このReadiView™ ビオチンにはカラータグが付いており、タンパク質に結合するビオチンの量の指標となります。従来ビオチンの定量に用いられたHABA法は精度が不十分でしたが、ReadiView™ ビオチンのカラータグはビオチン量と比例し、より高い精度と広い測定範囲で定量することができます。ビオチン結合や蛍光検出の結果に影響しないように、カラータグは慎重に選定されています。

特長

迅速なビオチン標識プロトコール（1時間以内）
簡単なビオチン量測定（測定波長280nm、360nm）

構成内容

ReadiView™ Biotin SE
反応バッファー
DMSO
洗浄チューブ
コレクションチューブ
スピンカラム

※スピンカラムを遠心する際に載せる遠心チューブは同梱されておりません。

製品データ

ビオチン標識率の計算

本キットによるビオチン化の標識率は、ビオチン化したタンパク質のA280とA360の吸光スペクトラムを測定することにより、下記の計算式で簡単に計算することができます。

[A360／9900]÷[A280／ε]

A360・A280
ε

：360nmもしくは280nmの吸光度
：ラベルされる抗体やタンパク質の分子吸光係数

ビオチンの修飾効率の検討

図2 ビオチン修飾効率テスト ヤギ抗マウスIgGを、ビオチン（AAT社#3010）または本キットのReadiView™ ビオチンにより標識し、抗体一分子あたりのビオチンの修飾効率を比較した。その結果、ビオチンとReadiView™ ビオチンとに修飾効率の差はほとんどないことが示された。

A：ビオチン標識IgG、HABA法にてビオチンを計測
B：ReadiView™ ビオチン標識IgG、HABA法にてビオチンを計測
C：ReadiView™ ビオチン標識IgG、カラータグにてビオチンを計測

カラータグによるアッセイ系への影響の検討

図3 マウスIgGのELISAアッセイ比較

ビオチン（AAT社#3010）または本キットのReadiView™ ビオチンにより標識したヤギ抗マウスIgG抗体を用いて、マウスIgGの濃度をELISAにより算出した。その結果、どちらの抗体もほぼ同じ曲線を描いており、450nmの比色反応にはカラータグによる影響はほとんどないことが示された。

図4 Hela細胞のイメージ比較

Hela細胞にマウス抗チューブリン抗体を反応させ、ビオチン（AAT社#3010）または本キットのReadiView™ ビオチンにより標識した抗マウスIgG（H&L）を二次抗体として反応させた。AAT社のiFlor488-ストレプトアビジンで染色し顕微鏡観察した結果、細胞の染色結果はほぼ同一であり、488nmの蛍光染色にはカラータグによる影響はほとんどないことが示された。

ReadiLink™ ビオチン標識・定量キット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ReadiLink^TM Protein Biotinylation Kit Powered by ReadiView^TM Biotin Visionization Technology	ABD	5521	1 KIT [3 Reactions]	￥48,000

【関連商品】

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ReadiLink^TM Protein Biotinylation Kit	ABD	5520	1 KIT [2 Labelings]	￥48,000
Biotin-X, succinimidyl ester	ABD	3010	25 MG	￥18,000
ReadiView^TM biotin succinimidyl ester	ABD	3059	5 MG	￥24,000