商品詳細 「NutriStem® hPSC XF ゼノフリー培地(ヒトES/iPS 細胞用)」
1. 多能性幹細胞の培養について
- 【01】 多能性幹細胞の一般的な培養方法は何ですか?
- 【02】 オンフィーダー条件(MEF)で培養していたiPS細胞をフィーダーフリー条件(マトリゲルコート)に移行させました。 すると細胞が接着せず、増殖が遅く、また通常見られないコロニー形態が観察されました。
- 【03】 Nutristem® hPSC XFは使用前にサプリメントの追加は必要ですか?
- 【04】 Serum-freeとXeno-Freeの利点について
- 【05】 使用前に、Nutristem® hPSC XFにTGF-βとbFGFを加えるべきですか?
- 【06】 Nutristem® hPSC XFは、殺菌試薬の添加は必要ですか?
- 【07】 どのくらいの期間、未分化状態を維持できますか?
- 【08】 多能性幹細胞の初期リプログラミングの後の播種条件について
- 【09】 ヒト多能性幹細胞(ES/iPS)を培養したときのNutriStem® XF培地と他社培地との比較データはありますか?
2. 多能性細胞の継代について
3. 分化培養について
4. 凍結保存について
- 【14】 多能性細胞の保存には、どの凍結保存培地を使用するべきですか?
- 【15】 凍結保存の推奨比率はどのくらいですか?
- 【16】 多能性細胞はどのくらいの期間、保存可能ですか?
- 【17】 凍結培地に血清を加える必要はありますか?
5. NutriStem® hPSC XFの保存条件と安定性について
1. 多能性幹細胞の培養について
多能性幹細胞の培養をサポートする、コーティング済みのフラスコ、ディッシュ、マルチウェルプレートが必要です。
コーティングには2つのカテゴリがございます。一つが、タンパク質ベースとした方法で、通常は、ECMを使用します。もう一つの方法としては、フィーダー細胞をベースとした培養です。通常、ヒトまたは、マウスの線維芽細胞を使用します。
【02】 オンフィーダー条件(MEF)で培養していたiPS細胞をフィーダーフリー条件(マトリゲルコート)に移行させました。 すると細胞が接着せず、増殖が遅く、また通常見られないコロニー形態が観察されました。
Growth Factor Reduced マトリゲルを使用した際に引き起こされる可能性があります。Growth Factor Reduced マトリゲル上では培養が難しいので、通常のマトリゲルもしくはヒトES細胞用マトリゲルをご使用ください。
NutriStem® は完全培地のため、サプリメントの追加は必要ございません。
この培地には、細胞の分化を防ぎ、多能性を維持する少量のタンパク質と成長因子が含まれます。
以下の利点が上げられます。
- 血清内の未知の成分の影響を排除します。
- 既知の成分を必要とする医療用アプリケーションについて、直接または、間接的にサポートします。
- 伝染病による健康リスクを排除します。
- Lot間差が少ない。
下記のグラフがヒトES細胞H1株をNutriStem® hPSC XF培地と他社培地で培養したときの比較データです。 96 ウェルプレートに継代数6 のH1 細胞を播種し、24 時間ごとに培地交換を行い細胞数を測定しました。他社培地に比べてNutriStem® hPSC XF培地の方が良好に細胞が生育している事が確認できました。

2. 多能性細胞の継代について
15%を超える分化を示さない場合、またはコロニーが成長して互いに接触しない場合でも、フィーダー細胞が培養されるため、フィーダー依存の培養は、継代培養から1週間後に新しいコーティングプレートに再播種する必要があります。 フィーダー細胞は古くなり、多能性コロニーの支持が低下します。
3. 分化培養について
多能性細胞は、未分化の外観を持っている必要がございます。分化率が15%を超える場合、均一な培養ではございません。そのため、分化細胞を示すコロニーがある場合は、コロニーを手動で除去する必要があります。
分化が開始する理由として、培養中の環境(温度、CO2濃度、pHの変化)、継代数、培地交換など、いくつかの物理的、生化学的な理由があります。
物理的、生化学的な理由のため、同じ細胞、同じ培養条件でも、分化率が異なる場合がございます。
4. 凍結保存について
推奨の凍結保存培地は、NutriFreez® D10 Cryopreservation Mediumです。この凍結保存培地は、ヒトiPS細胞、ES細胞で試験を行っております。また、動物由来成分フリー (ACF) の凍結保存培地で、DMSOとメチルセルロースを含みます。
この凍結保存培地で保存した多能性細胞は、解凍後、非常に良好な回復を示します。
5. NutriStem® hPSC XFの保存条件と安定性について
NutriStem® hPSC XF培地は凍結保存(-20°C)されています。 培地は2〜8℃または室温で解凍し、適切な量に分注し、再凍結する必要があります。 無菌状態で分注されている限り、培地の有効期限はボトルに記載されているとおりです。
解凍した培地は、暗所で2〜8°Cで最大2週間保存できます。
培地は2回解凍することができます。最初の解凍は元のボトルを分注するとき、2回目は培地で作業するときに解凍します。
部分的に解凍した培地を再凍結することは推奨しません。部分的に解凍した培地は、再凍結する前に完全に解凍し、穏やかに混合して再度凍結する必要があります。
ほとんどの系統では適応を必要とせず、NutriStem® hPSC XF培地に細胞を直接播種するだけです。
一部の系統では、最初の数回の継代で徐々に適応させるか、bFGFの濃度を上げる必要があります。