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Lentiviral Vector System 特集：レンチウイルス（レンチウイルスベクターシステム）

レンチウイルス（レンチウイルス発現ベクター）は、哺乳類細胞やモデル動物に、エフェクター分子（shRNA, miRNA, cDNA, DNA断片、アンチセンス、リボザイムなど）やレポーターコンストラクトを導入し、安定発現させるための優れたツールです。

コスモ・バイオでは、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入をサポートする製品を広く取り揃えています。近年ゲノム編集ツールとして関心の高い CRISPR-Cas9 システムのレンチウイルス導入商品も注目です。

背景

レンチウイルスとは？

レンチウイルス（レンチウイルス発現ベクター/Lentiviral Vector System）は、非分裂細胞を含むほぼ全ての哺乳動物細胞やモデル動物全体に異なるエフェクター分子（shRNA,miRNA, cDNA, DNA断片、アンチセンス、リボザイムなど）またはレポーターコンストラクトを導入し定常発現させるうえで最も効果的な媒体の1つです。偽ウイルス粒子にレンチウイルスがパッケージングされた発現コンストラクトは非常に高い効率で細胞に導入することができ、細胞腫によってはほぼ100%に近い導入効率が得られます。パッケージされたレンチウイルスコンストラクトは、初代培養細胞、幹細胞、分化細胞といった最も導入困難と言われる細胞へも高効率で導入できるケースが多々あります。

導入されたレンチウイルス発現コンストラクトは細胞内のゲノムDNAに組込まれ、siRNA, cDNAまたはレポーター遺伝子の定常的な長期発現を行います。内在性発現したsiRNAエフェクターは長期にわたり標的遺伝子のサイレンシングを行うため、定常的にノックダウンの表現型を示す機能解析用の細胞株や遺伝子組換え体が構築できます。また、ゲノムに組込まれたウイルスコンストラクトから全長cDNA発現させることで、細胞の表現型における機能獲得型効果を研究するうえで有用なツールを構築することができます。レンチウイルスベクターは、このような個々の標的遺伝子の機能獲得型/抑制型の研究のほかに、Cellecta(CLT)社のプール型shRNAライブラリーのような網羅的な遺伝子探索スクリーニングにおいても理想的なデリバリーシステムといえます。

レンチウイルス発現ベクターには、パッケージング、トランスダクション、ウイルス発現コンストラクトのゲノムDNAへの定常的な組込み、およびsiRNA/miRNA/cDNA/レポーター発現に必須の遺伝因子が含まれています。高タイターの偽ウイルスを産生するため、発現コンストラクトとパッケージングプラスミドをプロデューサー細胞（例：HEK 293T細胞）に同時導入する必要があります。レンチウイルスパッケージングプラスミドは、発現コンストラクトのRNAコピーを組換え体の偽ウイルス粒子に転写およびパッケージングするうえで必須なタンパク質をコードしています。

発現ベクター等をプロデューサー細胞にトランスフェクションした後、パッケージングに必要な機能的要素（例：Psi, RRE, cPPT）を保有する全ての転写物が大量産生します。発現コンストラクトの転写物は、パッケージングプラスミドより産生したヘルパータンパク質とともに水疱性口内炎ウイルス（VSV-G）偽型ウイルス粒子に効率的にパッケージされます。偽ウイルス粒子にパッケージされた発現コンストラクトはプロデューサー細胞より培養液中に分泌されるため、標的細胞への発現コンストラクトの導入に直接使用することも可能です。VSV-G偽型ウイルス粒子は、脂質結合や細胞膜融着を介したウイルス侵入を効率よく媒介し、哺乳動物または哺乳動物以外の標的細胞に感染します。

偽ウイルス型レンチウイルスは、神経細胞、樹状細胞、内皮細胞、網膜細胞、膵臓細胞、肝細胞、大動脈平滑筋細胞、気道上皮細胞、皮膚の線維芽細胞、マクロファージを始めとする多くの細胞種への感染に利用されています。また、レンチベクターを筋肉、脳、気道上皮、肝臓、膵臓、網膜および皮膚に直接in vivo送達し、導入遺伝子発現させることも良好に行われています。

Cosmo Bio would like to acknowledge and thank the Cellecta, Inc. for providing Lenti Virus information presented here.

注意：レンチウイルス粒子は「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」（通称カルタヘナ法）の使用規制対象品です。ご使用に際しては規制に即し適切にお取り扱いください。

コスモ・バイオで取り扱っているレンチウイルス製品を下記にご紹介します。

コスモ・バイオで取り扱っているレンチウイルス製品

■ **レンチウイルスを応用した遺伝子探索スクリーニング製品**
メーカー	商品	特長
CLT	プール型レンチウイルスshRNA ライブラリー	低コストかつ少人数でのゲノムワイド遺伝子探索実験を実現コンプレキシティの高いプール型ライブラリーを効率よく、かつ広範囲な細胞種に導入可能細胞分裂の活発な細胞、非分化細胞のいずれにも導入可能

■ **タンパク質発現**
メーカー	商品	特長
CBL	ViraSafe™ レンチウイルス発現システム	フレキシブル：ベクターは安全性、また使用比率を最適化していただくために、別包装で供給
CBL	ViraSafe™ レンチウイルス発現ベクター	マルチクローニングサイト：お好みの標的遺伝子を挿入可能第二世代および第三世代のどのレンチウイルスパッケージングシステムにも互換性 7kb までの大きさのインサート配列を挿入可能

■ **cDNAクローン**
メーカー	商品	特長
GCP	OmicsLink™ Expression-Ready ORF cDNA Clone	タグやセレクションマーカーの選択肢が豊富！（HIV骨格：48種類、FIV骨格：47種類) Expression-Ready：すぐに発現可能。時間を節約豊富なORF クローン数：完全長のヒト及びマウスのクローンを45,000 種以上ご用意配列確認済
ORG	TrueORF® Gold クローン	C-terminal Myc-DDK tag または mGFP tagを選択可能タグ抗体によるウェスタンでタンパク質発現確認済豊富なORF クローン数：15,000 クローン以上. クローン数は随時増えていますシークエンスを完全に確認済み Transfection ready

■ **si/shRNA発現レンチウイルスコンストラクト**
メーカー	商品	特長
APB	i‐Lenti™ siRNA発現ベクターコンストラクト	1コンストラクト￥15,000～のお手頃価格！しかもノックダウン保証つき！（４コンストラクトご利用の場合）安定： DNAの再編成がほとんどなく非常に安定ヘアピンループ型のsiRNAベクターを用いずにH1/U6プロモーターを使用トランスフェクションにもウイルスインフェクションにも使用可能
GCP	OmicsLink™ shRNA クローンコレクション	shRNAのターゲット配列は、独自のアルゴニズムで選択オフターゲット効率は最小限ベクタープラスミドのトランスフェクションやウイルスの導入効率は、EGFPレポータータンパク質で確認可能レンチウイルスベクターは、非分裂細胞やトランスフェクションが困難なセルラインでも効果的に形質導入できます。 70％以上のノックダウン効率を保証
ORG	HuSH-29 ゲノムワイド shRNA プラスミド	21merよりも効果的な29merのショートヘアピン構造のshRNA GFPレポーターで導入のモニタリングが可能 70%以上の遺伝子ノックダウンを保証
SCB	shRNA プラスミド（プール型）	19 ～25nt（＋ヘアピンループ）のレンチウイルスベクタープラスミドを3種類プール shRNA 配列は、サンタクルズ社のsiRNA遺伝子サイレンサー製品と同一

■ **shRNA発現レンチウイルス粒子**
メーカー	商品	特長
SCB	shRNA レンチウイルス粒子	19 ～25nt（＋ヘアピンループ）のレンチウイルスベクタープラスミドを3種類プール shRNA 配列は、サンタクルズ社のsiRNA遺伝子サイレンサー製品と同一 Ready-to-use:200μl（1 x 10⁶ IFU）のウイルス粒子

■ **shRNAベクターシステム**
メーカー	商品	特長
BOT	shRNAベクターシステム	Ready-to-use：制限酵素処理やベクター精製は必要なし。簡単なクローニング高効率、低バックグラウンド：経済的：1本のオリゴDNAを用意するだけでshRNA発現クローンの作製が可能

■ **pre-miRNA発現レンチウイルスコンストラクト**
メーカー	商品	特長
GCP	miExpress™ Precursor miRNA 発現クローン	非分裂細胞や導入が困難な細胞にも簡単デリバリー安定化細胞株選択マーカー（ネオマイシン）により、長期と一過性発現の両方の調節研究が可能導入効率はeGFP レポータータンパク質で簡単にモニタリング miRNA 発現コンストラクトの発現カセットはすべてシークエンス確認済
BOT	miRNA レンチウイルス発現ベクター＆ miRNA レンチウイルス粒子	イントロン内でのmiRNAプロセスが選択マーカーの発現に与える影響を最小限にヒトEF1αプロモーターの利用で、細胞内での発現抑制なし赤色蛍光 puromycin-N-acetyl-トランスフェラーゼでモニタリング可能 miRNA発現用レンチウイルス粒子は、1×10⁷IU/mLとしてご提供

■ **iCRISPR-Cas9 ゲノム編集用ガイドRNA**
メーカー	商品	特長
APB	iCRISPR-Cas9 ゲノム編集用ガイドRNAライブラリー	Cas9発現野生型Cas9ヌクレアーゼ改変型Cas9ニッカーゼレンチウイルスベクターパッケージ済みレンチウイルスパッケージ済みアデノウイルスゲノムワイドiCRISPR sgRNAライブラリーレンチウイルスベクターパッケージ済みレンチウイルスパッケージ済みアデノウイルスヒト、マウス、ラット

■ **レンチウイルス濃縮試薬**
メーカー	商品	特長
ORG	ORIGENE社レンチウイルス濃縮試薬	ウイルスの力価を最大100倍に向上混合して遠心するだけの簡単な操作で、超遠心は不要スケールアップが容易凍結融解によるダメージから保護
メーカー	商品	特長
GCP	Lenti-Pac™ レンチウイルス濃縮溶液	レンチウイルスの回収率：90%以上力価（転写 Units/f）を10×～100×に向上させます。全てのタイプのレンチウイルス粒子に対応可能です。全行程を3時間以内で行えます。超遠心は不要です。

コスモ・バイオで取り扱っている受託サービス

■ **レンチウィルス作製受託サービス**
メーカー	商品	特長
SGL	レンチウィルス作製受託サービス	独自のLentiMAX技術により、1.0×10⁹ TU/mL以上の高タイターに対応安価、短納期幅広いプロモーター・マーカーレポーターを選択可能上記以外でもLTR間の配列を指定して作成可能