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背景

AAV(アデノ随伴ウイルス)を用いた遺伝子治療薬の開発において、安全性と有効性の検証には正確な力価測定が欠かせません。KACTUS社のAAV Titration ELISAキットは、独自の免疫手法によって開発された高性能なリコンビナントモノクローナル抗体を使用しており、血清型(AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9)ごとに特異性の高い安定した測定を実現します。

測定手順

  1. 分割可能なテストストリップを備えたプレコート済みマイクロタイタープレートを使用します
  2. AAV標準品およびサンプルをプレート上でインキュベートします
  3. ビオチン標識検出抗体を添加し、AAVカプシドに結合させます
  4. ストレプトアビジン-HRPコンジュゲートを添加し、抗体-AAV複合体と結合させます
  5. HRPがTMB基質を酸化させることで、AAVカプシド力価に比例した色の変化が生じます
AAV Titration ELISAキットの測定手順を表した模式図

特長

  • 最適化されたリコンビナントモノクローナル抗体
  • 高特異性
  • 広い直線範囲
  • 高精度
  • 高い再現性
  • 簡単な操作性

製品データ

広い直線範囲
AAV9 Titration ELISA Kitでのスタンダードカーブ例

図1. AAV9 Titration ELISA Kitでのスタンダードカーブ例

本キットの定量範囲は、2.03×107 - 1.30×109 capsids/mL であった。

ロット間の一貫性
2つのロットでテストされたAAV9 Titration ELISA Kitのスタンダードカーブのグラフ

図2. 2つのロットでテストされたAAV9 Titration ELISA Kitのスタンダードカーブ

 

スタンダードカーブは再現性が非常に高く、R2 > 0.99 を示した。

インタクトカプシドへの特異性
インタクトおよび変性AAV9カプシドタンパク質に対するAAV9抗体の結合性を検出したELISAアッセイの結果を示したグラフ

図3. インタクトおよび変性AAV9カプシドタンパク質に対するAAV9抗体の結合性を検出したELISAアッセイ

 

AAV9検出抗体は変性したAAV9カプシドタンパク質には結合性を示さなかった。

各血清型への特異性
異なる濃度のAAV9抗体を用いて、他の血清型(AAV2/5/8/9)のカプシドタンパク質に対する交差結合性の間接ELISA法による検証結果を示したグラフ

図4. 異なる濃度のAAV9抗体を用いて、他の血清型(AAV2/5/8/9)のカプシドタンパク質に対する交差結合性の間接ELISA法による検証

 

AAV9 Titration ELISA Kitは、AAV9血清型に非常に特異的で、他のAAV血清型との交差反応性を示さなかった。

高い正確性
AAV9 Titration ELISA Kitでのスパイクした希釈バッファー(左)およびHEK293細胞溶解液(右)における3つのAAV9力価(高、中、低)の回収率試験結果を示したグラフ

図5. AAV9 Titration ELISA Kitでのスパイクした希釈バッファー(左)およびHEK293細胞溶解液(右)における3つのAAV9力価(高、中、低)の回収率試験

 

希釈バッファーおよび細胞溶解液において検出された、異なる力価のAAV9サンプルの回収率はすべて80%から120%の間であり 、本キットがAAV9力価検出において高い正確性を備えていることを示した。

高い再現性
図6. 同一バッチのAAV9テストキットを使用して、3つの異なる力価(高、中、低)のAAV9サンプルを測定した。各サンプルについて10回のテストを実施し、これら10回の力価テストの結果から、平均値および変動係数(%CV)を算出した結果を表した表

図6. 同一バッチのAAV9テストキットを使用して、3つの異なる力価(高、中、低)のAAV9サンプルを測定した。各サンプルについて10回のテストを実施し、これら10回の力価テストの結果から、平均値および変動係数(%CV)を算出した。

 

3つすべてのサンプル濃度(高、中、低)において%CV(変動係数)は10%未満であり 、AAV9 Titration ELISA Kitが優れたバッチ内再現性を備えていることを示した。

商品ラインアップ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AAV2 Titration ELISA Kit詳細データ KCT AV2-MM00B 96 TEST
¥152,000
AAV5 Titration ELISA Kit (AV5-MM00B)詳細データ KCT AV5-MM00B 96 TEST
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AAV6 Titration ELISA Kit (AV6-MM00B)詳細データ KCT AV6-MM00B 96 TEST
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AAV8 Titration ELISA Kit (AV8-MM00B)詳細データ KCT AV8-MM00B 96 TEST
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AAV9 Titration ELISA Kit (AV9-MM00B)詳細データ KCT AV9-MM00B 96 TEST
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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