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アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの製造工程のモニタリングに。AAV9 VPタンパク質スタンダードリコンビナントAAV9 カプシドタンパク質

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メーカー名：Progen Biotechnik GmbH

AAV9 カプシドを構成するVP1、VP2、VP3の3種のリコンビナントタンパク質です。カプシドタンパク質の同定、VP1～3の比率、純度、定量化の決定に用いることが可能です。
WB、ドットブロット、キャピラリー電気泳動、SDS-PAGEなどのアプリケーションに適用しています。
AAVの遺伝子治療の研究が発展するにつれて、高収率、高純度、高品質のAAV粒子の必要性が高まっています。このことから、ベクター製造工程中の包括的なモニタリングの確実性もますます重要となってきています。VP1、 VP2、VP3の発現レベル、およびAAVカプシドタンパク質の発現比をモニタリングすることで、早期に生産の収量や力価を最適化することができます。Progen社 AAV9 VP製品を用いることで、正確なモル比を持つ VP1、 VP2、VP3混合スタンダードを作成可能です。

特長

AAV9 VP1-3のセット品および単品フォーマットを取り揃え
比率分析に有用
正確なモル濃度

適用	WB、ドットブロット、SDS-PAGE
精製方法	Ni-NTA chromatography
タグ	Hisタグ（N末端）
組成	6 M urea in PBS（溶液品）
分子量	VP1: ~90 kDa, VP2: ~68 kDa, VP3: ~62 kDa

AAV9 VP1 + VP2 + VP3, recombinant proteins, set　（セット品）

図1　AAV9 VP1,VP2,VP3のセット品（品番：72009）を用いたSDS-PAGE解析
SDS-PAGE分析を行うために、タンパク質1μgを10μlのPBS及びサンプルバッファーで希釈し、95℃で5分間変性させた。サンプルを4～20%のグラジエントゲル(200Vで40分間)にロードした。その後、ゲルをクマシー溶液で室温で1時間染色し、水で脱色した。AAV9のVP1、VP2及びVP3の純度は95%以上。

図2　蛍光B1抗体を用いたAAV VPタンパク質のウエスタンブロット
AAV2 VP リコンビナントタンパク質 (カタログ番号 72001)、AAV5 VP リコンビナントタンパク質 (品番：72005)、AAV6 VPリコンビナントタンパク質 (品番：72006)、 AAV8 VP リコンビナントタンパク質 (品番：72008) 、 AAV9 VP リコンビナントタンパク質 (品番：72009) を B1 抗体 (品番：690058)をもちいてウエスタンブロット解析した。ウェスタンブロット分析は、1 つのレーンに結合された 1:1:10 (13.5 ng VP1: 11 ng VP2: 100 ng VP3) の正確なモル比で実行された。PVDF膜はPBST中で5%ミルクで室温で1時間ブロックした。一次抗体である抗AAV VP1/VP2/VP3、B1(品番：690058)をブロッキング緩衝液(抗体濃度500 ng/ml))で希釈し、室温で1時間インキュベートした。二次抗体である抗マウスIgG HRPもブロッキング緩衝液(抗体濃度200 ng/ml))で希釈し、室温で1時間インキュベートした。バンドはPierce™ ECL Western Blot Substrateを用いた化学発光検出により可視化した。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
AAV9 VP1 + VP2 + VP3 proteins set	PGN	72009	1 SET [10 μg each, 100 μg/ml]	￥253,000

AAV9 VP1、VP2、VP3　リコンビナントタンパク質（個別商品）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
AAV9 VP1 protein	PGN	640842	10 UG [100 μg/ml]	￥98,000
AAV9 VP2 protein	PGN	640843	10 UG [100 μg/ml]	￥98,000
AAV9 VP3 protein	PGN	640844	10 UG [100 μg/ml]	￥98,000